【求助】转膜缓冲液

最新回复

• guagua (2014-5-15 18:13:35)

  
  使SDS-蛋白质复合物变形,更容易走出gel.

• birdfish (2014-5-15 18:13:58)

  
  那SDS-蛋白质复合物变性的目的呢?

• guagua (2014-5-15 18:14:16)

  
  就是使SDS-蛋白质复合体的直径变小,更容易使蛋白质走出凝胶.

• is2011 (2014-5-15 18:14:33)

  
  我记得甲醇具有固定凝胶和蛋白的作用，甲醇使凝胶的孔径变小（最明显的现象是凝胶从电泳液转入转膜液后会收缩变小），更不利于蛋白迁移出凝胶。SDS使蛋白形成棒状结构，更利于蛋白迁移。

• is2011 (2014-5-15 18:14:55)

  我找了个文献的叙述，咱们一起对对
  John M. Walker. The Protein Protocols Handbook SECOND EDITION 2002; P331如下叙述：
  Ref 1: Garfin, D. E. and Bers, G. (1982) Basic aspects of protein blotting, in Protein Blotting (Baldo B. A. and Tovey, E. R., eds.), Karger, Basel, Switzerland, pp. 5–42.

  
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• jkobn (2014-5-15 18:15:23)

  请问各位网友，转膜液里加甲醇的作用？
  
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  甲醇能具有对抗SDS的作用,却能增加蛋白与PVDF膜（NC膜）的吸附，sDS对于蛋白的迁移是必要的，尤其有助于大分子量蛋白从凝胶上的转移。但由于膜结合需要疏水相互作用，SDS过多会抑制结合，尤其对于硝酸纤维素膜,所以需要甲醇对抗。但如果从蛋白上剥离太多SDS，将无法将蛋白转移出膜；一般地，甲醇含量为10%-20%，为提高大分子蛋白的转膜效率，可降低甲醇的浓度（5%-10%），甚至不用，能够促进蛋白从胶中释出，转移至膜上；如果小分子量蛋白如10Kd，则要提高甲醇的浓度（30-40%）。转移缓冲液中甲醇的浓度太高，可以将蛋白质与SDS过份分离导致蛋白质沉淀在凝胶中，且过量甲醇会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量的蛋白质转移。另外，注意你选择的膜的材质，是否为PVDF膜，如是，则需要润湿。 此外，移效率受电泳缓冲液中的SDS和缓冲液的PH值等影响。为提高转膜效率，SDS的浓度应不高于0.1%，PH应不低于8.0。