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【求助】请教一般蛋白中的脂质怎么能够很好的去除啊

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-16 11:07    作者: baidukk    来源: 分析测试百科网

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【求助】请教一般蛋白中的脂质怎么能够很好的去除啊
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头痛
我最近在做G-CSF的纯化工艺,但是很糟糕的是,
里面有很多脂质很难去除,而着也间接的影响后面的实验进程
例如上Q柱的时候,吸附量就不大,只有2mg/ml左右,并且很难洗脱下来
必须要有一个很苛刻的条件甚至要很高的PH才 可以洗脱的
很头痛,试了很多条件都很难去除的,有机溶剂抽提等都不是很有效的
叩求哪位师兄师姐肯给我解惑
非常 感谢
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最新回复

  • avi317 (2014-5-16 11:07:32)


    将样品超速离心试一下吧

  • ladyhuahua (2014-5-16 11:07:51)


    有没有用氯仿试试行不行？

  • baidukk (2014-5-16 11:08:09)


    离心不行
    用有机溶剂(乙醚)试过,效果并不好

  • avi317 (2014-5-16 11:08:26)


    没说明白,有前因才有后果.
    你凭什么判断是脂质？
    G-CSF来源？

  • vcve (2014-5-16 11:08:45)


    用正丁醇抽提，效果还不错，这个方法我用过很多次了

  • avi317 (2014-5-16 11:09:04)


    用正丁醇抽提，效果还不错，这个方法我用过很多次了

  • baidukk (2014-5-16 11:09:27)

    生物工程，原核大肠杆菌
    还有就是复性中加哪种表面活性剂要好一点啊
    tween20,tween80.还是triton100

  • xue258 (2014-5-16 11:09:45)


    G-CSF作为药物已在我国上市,老产品了.
    你的现象应为复性效果太差,多聚体强吸附于柱上.
    多摸索复性条件吧

  • baidukk (2014-5-16 11:10:09)

    sds-page 跑电泳看复性的效果都还不错的
    二聚体并不多的
    浓度都还可以的

  • avi317 (2014-5-16 11:10:35)


    没有做过楼主要的那个蛋白。下面贴的是从网上找到如何去除抗体中脂类的方法，可供参考
    1.Add 0.04 mL 10% dextran sulphate solution and 1 mL 1 M calcium chloride per mL sample.
    2. Mix for 15 minutes.
    3. Centrifuge at 10,000 × g for 10 minutes.
    4. Discard the precipitate.
    5. Exchange the sample into TBS (Tris Buffered Saline) using an Amicon Ultra-15 device dialysis, or a desalting column. Do not buffer exchange into a phosphate-containing buffer such as PBS.
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