【求助】蛋白浓缩（做磷酸化蛋白质研究的高手进来）

最新回复

• summerxx (2014-5-16 15:50:35)

  QUOTE:

  原帖由 wawa 于 2014-5-16 15:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我提取单核细胞的总蛋白，用的是RIPA LYSIS BUFFER,里面加有磷酸酶抑制剂，为的是保证磷酸化蛋白质不去磷酸化。 我接下来做western blot 研究 ，但是由于蛋白浓度太低， 因此我想把总蛋白浓缩一下，不知道用什么方法可以使蛋 ...

  用半透膜透析试试看。

• summerxx (2014-5-16 15:50:53)

  
  比如外界是高浓度的蔗糖溶液的透析，或者外界是其他一些干燥剂，将透析袋包埋在里面，吸走一些水分。

• ukonptp (2014-5-16 15:51:18)

  
  超滤效率比较好，而且冷冻离心保持蛋白性质。
  但就是超滤管要将近30元一个。

• ero11 (2014-5-16 15:51:41)

  我们实验室用PEG包埋

• moonlight45 (2014-5-16 15:51:59)

  
  PEG6000以上都可以，效果最好的是20000

• 3N4G (2014-5-16 15:52:20)

  
  GE的clean up kit简单易行,和双向匹配,我也用.

• 98776langtao (2014-5-16 15:52:45)

  
  如果想浓缩富集磷酸化蛋白，可以直接用铁离子琼脂糖凝胶去吸附，然后取点填料跑电泳即可，这样避免别的蛋白干扰．

• zsxan1990 (2014-5-16 15:53:04)

  
  真空冷冻干燥

• c86v (2014-5-16 15:53:29)

  
  超滤。。。

• lixi559 (2014-5-16 15:53:47)

  
  离心超滤的效果比较好!
  cuturl('WWW.MILLIPORE.COM') 有好多可以参考

• fei1226com (2014-5-16 15:54:17)

  
  超滤
  不影响蛋白

• BOSS2011 (2014-5-16 15:54:39)

  低温干燥行不？？蛋白应该不会变性吧。。。。。。。不知道对磷酸化有没有影响，愿高手执教