【求助】关于蛋白表达

最新回复

• sunnyB (2014-5-20 10:21:00)

  
  这个问题要是仔细想想，还真的挺有趣。我把我能想到的先罗列以下，还有的各位也罗列看看。
  1 目的基因是假基因
  2 克隆了不相关片断
  3 克隆时出现突变，导致ORF终止密码提前出现
  4 克隆时出现致命性突变，导致表达蛋白不能正常折叠，或者没有活性
  5 包装质粒时 ORF 衔接不正确
  6 包装质粒时，调控区出现损坏
  7 转化筛选出现失误，挑取了错误的克隆
  8 转化到不合适的宿主细胞
  9 表达条件不合适
  10 表达出的蛋白质被细胞内的蛋白酶降解
  11 由于操作不熟练，或者不熟悉实验室操作流程，导致工程菌混乱

• eric930 (2014-5-20 10:21:35)

  
  还有几个问题想请问sunnyB：
  1.所谓的表达条件大概有哪些?
  2.合适的宿主细胞是指?

• 98776langtao (2014-5-20 10:21:55)

  
  诱导表达条件包括起始诱导浓度，培养温度，IPTG浓度等。
  合适的菌株就不太好说了，比如如果你的蛋白对细胞有毒性的话就要选择用耐受细胞毒性的菌株；如果你的蛋白含有稀有密码子就要用提供稀有密码子的菌株。
  另外还有一些说不清楚的东西，就要靠经验和运气了。比如我们试验室用的一种乳糖诱导培养基，在诱导表达时比较温和，蛋白表达量相当，菌体生长量大，在摇瓶条件下可以长到10 OD以上。

• eric930 (2014-5-20 10:22:15)

  
  耐受细胞毒性的菌株和提供稀有密码子的菌株有哪些呢?

• 2541 (2014-5-20 10:22:30)

  
  耐受细胞毒性的菌株和提供稀有密码子的菌株可以查一些公司的产品目录,都写得比较清楚

• am10 (2014-5-20 10:23:04)

  耐受细胞毒性的菌株和提供稀有密码子的菌株有哪些呢?

  
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