【求助】蛋白浓度测不出来（Bradford法）

最新回复

• yjf1026 (2014-5-20 10:55:08)

  是否蛋白浓度过低？你所用的测量杯每次是否都洗干净了？BSA是否也是用蛋白裂解液溶解的？如都没问题，则只能是仪器不稳定所致。

• jrwyyplt (2014-5-20 10:58:37)

  
  这样的处理液下,Bradford 法是根本测不准的.
  DTT,还有两性电解质都会使G250变蓝.
  要用专门的2D-Kit试剂盒才能测定你样品的真实蛋白浓度.

• remonte (2014-5-20 10:58:55)

  
  bio－rad试剂盒对DTT等物质有一定兼容性的
  可以查看说明书
  待测蛋白浓度要在你的标准曲线范围之内，太大太小都不再准确

• 小螺号 (2014-5-20 10:59:17)

  
  同意楼上的观点,确实在制定broadford曲线的时候要注意你的样品的测值范围是否能够落在标准曲线内,要做复孔,对于BSA的量可以适当的扩大.提高它的测试范围,DTT应该不会对于此法有影响,对于一些去诟剂要注意,SDS低于0.01%,TritonX-100低于0.05%,Tween低于0.015%.标准曲线要做相关性分析.相关系数大于0.95的比较好.

• idoww (2014-5-20 10:59:37)

  除了仪器的问题外，不知楼主蛋白含量大概在什么范围？如果蛋白浓度低于标准曲线的浓度范围，那么就测不出来，可以考虑使用piercce公司的micro BCA assay kit.在0～40μg/ml线性关系良好。而标准的蛋白试剂盒测定一般是0～2000μg/ml。

• INK (2014-5-20 10:59:56)

  
  BSA不用裂解吧，可能是放置的时间太久

• orangecake (2014-5-20 11:00:12)

  
  你可以试一试加大样品量，然后按比例可以算出蛋白含量。我们的做法是将1μl样品加到5μl，然后除以5，就可以得出蛋白含量。不知道对不对，仅供参考。