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【求助】蛋白Markerl转膜怪现象

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-20 18:20    作者: glass    来源: 分析测试百科网

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【求助】蛋白Markerl转膜怪现象

我的预染蛋白Marker分子量：6.5; 16.5; 25; 32.5; 47.5; 62; 83; 175;
在胶上跑电泳时可以清楚的看见8条带，但转到PVDF膜上时就只有三条带了，它们分别是：16.5; 25; 62 .175（这个条带还没有转到膜上，可能是转膜时间太短）。中间条带不知去哪里了，真是奇怪！
1：我的仪器是：Bio-rad
2：湿转条件：45V；3小时
3：湿转电泳缓冲液：Tris :3.035g; 甘氨酸14.415g ;甲醇150ml然后加双蒸水至1000ml
4：PVDF膜处理：甲醇泡10秒；在双蒸水中泡5分钟然后在 湿转电泳缓冲液泡10分钟。
5：凝胶用湿转电泳缓冲液浸润15分钟
不知是什么原因会这样，请高手分析一下，谢谢了。
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最新回复

  • jujuba (2014-5-20 18:20:24)


    甲醇泡的时间长一点试一试了,2分钟吧,或者是有些部分没有被甲醇浸透,所以没法固定蛋白

  • hold住 (2014-5-20 18:20:43)


    是不是Marker本身的问题啊？

  • ritou1985 (2014-5-20 18:21:16)


    我也觉得是MARKER的问题,

  • mamamiya (2014-5-20 18:21:51)


    买来的Marker在用之前用95度3min处理一下.

  • greenbee (2014-5-20 18:22:12)


    我的仪器是：Bio-rad
    2：湿转条件：100V；70 min
    3：湿转电泳缓冲液：Tris :3.035g; 甘氨酸14.415g ;甲醇200ml然后加三蒸水至1000ml
    4：PVDF膜处理：甲醇泡半小时；在双蒸水中泡5分钟然后在 湿转电泳缓冲液泡10分钟。
    5：凝胶用湿转电泳缓冲液浸润15分钟
    排除marker 自身的问题,换上面的条件试试
    好运!!!

  • huifeng0516 (2014-5-20 18:22:30)

    换一支Marker试试，反正又不贵！嘻嘻：）或者用NC膜再试试！

  • @花开花落@ (2014-5-20 18:22:48)

    个人认为是MARKER的问题，MARKER中的每种分子量的蛋白浓度未必是相等的，有多有少。可能丢失的那三种本身它的量就比较少，加上转膜过程中有丢失，因此就看不见了。建议 可以适当增加MARKER的量然后再转膜试试看。还不行的话就换个MARKER吧
    祝好运！！
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