【求助】大肠杆菌蛋白电泳

最新回复

• hold住 (2014-5-21 15:28:25)

  
  你上样体积是多少？我估计是上样量太大了。我的经验是诱导后的100ul菌液离心，去上清，重悬于大约30或40ul 1*上样缓冲液中，上10ul，跑出来的条带比较清晰。当然与菌的密度有关。

• 66小飞侠 (2014-5-21 15:29:13)

  一次多上几个样，依次2倍稀释，找到合适的上样浓度。我一般是离心后加同菌液体积水，混匀，取样加2*缓冲液，处理后上样。

• wmp1234 (2014-5-21 15:29:41)

  
  呈微笑型可能是胶没有凝结好.
  我做大肠杆菌电泳是诱导后3-4h起1ml菌液,离心沉淀用50ul双蒸馏水重悬加10ul上样缓冲液,再取10ul电泳,也有较好的条带.
  多试几次就行了

• fei1226com (2014-5-21 15:30:24)

  
  那若是2x上样缓冲液加多少呢，100微升菌离心后，加10微升水与10微升2x上样缓冲液行吗？还是直接加10微升上样缓冲液?
  我不懂的是2X到底是什么意思，是指与样品等体积混合还是与水稀释，那不就是十倍了吗

• is2011 (2014-5-21 15:30:46)

  
  1)是100微升菌离心后，沉淀加10微升水再加10微升2x上样缓冲液。估计你的上样量太大了，像你提到的制备样品的方法上3－5微升即可，不知道你上了多大体积的样品。
  2)2×上样缓冲液就是用以前要做两倍浓度的上样缓冲液，以前做等体积稀释。即V体积菌体悬液＋V体积2×上样缓冲液。
  3)我通常是取300微升菌液12000rpm,离心2min弃上清,除尽培养基。加30微升灭菌水重悬菌体，然后加30微升上样缓冲液混匀，沸水浴5min；取3或5微升上样。

• fei1226com (2014-5-21 15:32:31)

  
  谢谢各位了
  但是在不知道蛋白浓度情况下一般取多少上样呢，
  若测了浓度，那以多少量比较好呢

• flower-201 (2014-5-21 15:32:54)

  
  在不知道蛋白浓度的情况下，如果是正常表达的大肠杆菌可以上5微升处理过的蛋白样品就可以。你可以先小试一次，样品量尽量不上太大，否则会看不清各个蛋白条带。

• fei1226com (2014-5-21 15:33:40)

  谢谢各位大侠了
  我现在上8微升还可以
  另外还想请教一下各位
  有没有用过bradford法测蛋白浓度
  其中是如何处理菌体的呢
  我是先超声波后加8M尿素
  想找一条比较快速而准确的方法
  谢谢