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【求助】blue native

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-21 16:28 作者: standbyme 来源: 分析测试百科网

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【求助】blue native

请做过blue-native的战友帮帮忙:我的第一向有条带,跟文献上的很类似,但第二向转出来点不多.第一向胶条用百分之一的SDS和巯基乙醇处理了15分钟,然后水洗,直到没有巯基乙醇的气味为止.二向用的是Tricine系统..操作没有问题.谢谢!

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plaa (2014-5-21 16:29:09)

最近做bn的人很多啊，你的平衡液应该是按照配方做出来的吧，只是水洗的时候可以不要洗那么多次，一般洗洗就可以了，洗到完全没有巯基乙醇的气味就有点过了，这样对结果不是很好，当然巯基乙醇太多会造成横纹。你所说的二向点不多不知道是什么样子的结果，可以贴个图看看。还可以试试银染看结果怎么样。有什么疑问可以pm我
yes4 (2014-5-21 16:29:40)

我们最近也想做BN/SDS-PAGE(博士课题),整个技术路线可能跟你们的差不多：
1)诱导细胞模型;
2)样品制备；
3)BN-PAGE/Tricine SDS-PAGE;
4)蛋白质功能鉴定；
请教一下，整个过程做下来，感觉难不难？
我们可以交流一下、互相帮助吗？
standbyme (2014-5-21 16:30:26)

我的一向和二向的图如下,请老师多多指点.

12021712.snap.jpg
jujuba (2014-5-21 16:30:57)

楼主，你的上样量是用多少材料提取的？，怎么可以准确地定量呢？你是参考了那一篇文献？
小弟现在也正在做这方面的实验，但是一直不理想，在第一乡电泳中根本没有任何的条带，请问是何种原因呢？
standbyme (2014-5-21 16:31:23)

我这个学期都在做blue native实验，但结果不理想。刚开始跑的时候一向也没条带。上图的上样量是16mg的pellet得来的。裂解后用BCA测含量时没测准，所以我也不知道具体上了多少。我参考的是Nature上的protcol。2006年的。一向没有条带可能是detergent/protein的比例不对。这个比例很重要。
jujuba (2014-5-21 16:31:50)

我还想问一下，你们在纯化线粒体线粒体之后还将他们破碎了吗，我昨天用超声波破碎了一下，结果也不是很好的。
standbyme (2014-5-21 16:32:09)

我做的样品不是线粒体。