【求助】蔗糖密度梯度离心的样品收集问题

最新回复

• bring (2014-5-24 17:46:22)

  
  我做线粒体提取的时候用过蔗糖密度梯度离心.
  当时是用注射器来吸取目的界面的,虽然会有一些损失,但是对上层界面的扰动比较小.
  因为是做线粒体的双向电泳,我当时把蛋白沉淀复溶除盐了,复溶时加裂解液少一些,也算起到浓缩作用了吧

• yes4 (2014-5-24 17:47:18)

  
  请问楼上的，你在做线粒体蛋白双向电泳时，有没有测定你所提的线粒体的纯度，也就是你有没有测线粒体的标志酶活性呀？有没有必要测呀？我也要做线粒体双向电泳，请予以答复，谢谢。
  还有我以前用蔗糖密度梯度法将线粒体得到后，用TCA,丙酮沉淀法，得到线粒体蛋白，然后跑双向，做过一次，感觉还行。

• finger (2014-5-24 17:47:37)

  我的线粒体完整性是根据电镜结果判断的,是在我们学校电镜室完成的.
  纯度是做了western,检测了线粒体中是否含有胞浆蛋白.
  不过,我觉得一般电镜结果比较好的话就可以了吧.
  还有一些实验室有电动匀浆器,以及很规范的protocol,提取之后测量线粒体的呼吸控制比和磷氧比结果是很好的.

• u234 (2014-5-24 17:47:58)

  请问楼上的，线粒体提取后怎样获得线粒体蛋白啊?用什么方法啊？谢

• finger (2014-5-24 17:48:21)

  加裂解液裂解就可以了.我做双向电泳,用的是含尿素和chaps的裂解液.之后冰浴超声.为了除盐,又做了沉淀复溶.

• u234 (2014-5-24 17:48:49)

  
  我是提线粒体蛋白做WS的，不知怎么提？能否指导下？谢

• ladyhuahua (2014-5-24 17:49:18)

  "加裂解液裂解就可以了.我做双向电泳,用的是含尿素和chaps的裂解液.之后冰浴超声.为了除盐,又做了沉淀复溶"
  能否详细说说你的步骤呢.小弟也在做这个东西.谢谢

• u234 (2014-5-24 17:49:38)

  
  楼上的你也提线粒体蛋白吗?能否交流下