【求助】为什么sds 做胶的时候 梳子旁边的胶都不凝呢 ？

最新回复

• wu11998866 (2014-5-24 18:09:59)

  我也经常遇到这样的 事，就是两边会漏掉，这样就有几个空上不了样，我想多加点TMED,加速聚合。这样可以解决这个问题！

• kuohao17 (2014-5-24 18:10:32)

  
  多加未必是好方法，虽然增加TEMED可以加快聚合速度，但过量的TEMED和APS会引起电泳时蛋白电泳带的畸变，胶脆易裂。漏胶可能跟你的玻璃板没夹紧有一定关系,我以前也有这种情况，后来发现玻璃板和下面的胶条不够密封，重装就好了。至于梳子旁边的胶都不凝，我认为：1，可能是制备浓缩胶时TEMED和APS没有充分混匀 2，凝胶系统中试剂质量有问题，特别是APS 3，聚合时间不够

• plaa (2014-5-24 18:11:46)

  
  我觉得是时间不够,只要成型了,对上样没影响,就问题不大

• bring (2014-5-24 18:12:31)

  
  不是时间的问题, 以前也是梳子两边的一两个孔老是漏孔。后找到了一个小窍门.就是上层胶倒好后把胶往外倾斜45度左右,估计是倾斜后胶不会漏???也解释不清楚,可试试吧。

• fei1226com (2014-5-24 18:12:49)

  
  确定板子与胶条之间是固定好的不会遗漏？
  温度低了，胶凝固很慢，可以放在37度。
  APS和TEMED可以多加一点点，如10％APS 30ul可以加35ul，对电泳影响不大

• yjf1026 (2014-5-24 18:13:05)

  
  我也遇到过这个问题，分析下来，可能的原因是：
  1.浓缩胶中所加的TEMED、APS等用的时间太久，不能使胶很好聚合成形；
  2.另外，浓缩胶聚合的时候，体积会缩小，这样如果不能很快聚合的话，自然两边的会往中间收缩，导致两边的梳子孔漏胶而不能加样！所以要注意补加1－2次。
  3.低温使胶不能很快聚合。放入37度会好些。
  如果TEMED，APS没有什么问题，如果在插入梳子后两边仍漏，可以用牙签之类的东西堵住梳子和两边的空隙，这样也可以解决这个问题。

• plaa (2014-5-24 18:13:36)

  
  我一般是混匀浓缩胶后立刻加,然后插入梳子,稍等片刻后,在梳子梳孔附近再滴加浓缩胶,每一个孔都加,不用担心加多了它从边上流出来,在室温聚合,聚合差不多了,我就把它放在冰箱4°,感觉这样的很好,取出梳子后,都可以清楚的看到梳子孔,而且那些梳孔很整齐,大家可以试一下

• pengke1983 (2014-5-24 18:13:55)

  
  的确，我也有这样的经历，胶配好后放4度一段时间会好些，比立即电泳要好。

• ero11 (2014-5-24 18:14:12)

  
  可能是你那的温度样低了，看看你的TEMED，APS没有什么问题。
  如果是胶漏的问题可以先加水看看那块漏，再处理。

• lixi559 (2014-5-24 18:14:33)

  
  我就觉得是两个玻璃板之间的胶条没有放好！

• kuaizige (2014-5-24 18:14:50)

  解决方法:
  插入梳子之前对梳子进行处理:
  millionpore水冲洗几遍,用干净的卫生纸擦干,再用吹风机吹干.你可以再试试.如果你不吹干,相当于把stacking胶稀释了,并且不易凝