【求助】western 条带弥散,是和胶有关吗?

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-28 15:30 作者: shenkunjie 来源: 分析测试百科网

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【求助】western 条带弥散,是和胶有关吗?

各位大虾，最近实验室的几个同学做出来的western 胶片上的条带都很弥散，连内参都是这样，就是很虚不实的样子，不知是什么缘故，和胶有关吗？请各位赐教，谢谢！

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u234 (2014-5-28 15:31:22)

跑胶跑得不好可能是一个原因
另外也有可能是在你曝光得时候，胶片与膜之间有空隙，没有紧贴在膜上
曝光时间也是有影响的
wmp1234 (2014-5-28 15:31:41)

应该是跑胶没跑好的原因。与转膜的关系应该不大地。
ero11 (2014-5-28 15:32:59)

如果出现目的条带的话,应该是胶没跑好.这个时候我推荐你用大的玻璃版来跑胶.这个时候你可以把Stacking胶的长度可以长一点，一般为2.5cm,这样的浓缩效率就好了,然后,一般用90V在常温下跑个6-10h估计差不多了(没必要跑完全程,只要目的蛋白已经分开了就可以了,大胶全部跑完的话估计要16-18h),也可以用200V with cooling,一般跑个4-5h就差不多了.这样出来的条带就非常细,非常漂亮,可以在发paper的时候用.
ero11 (2014-5-28 15:33:16)

哦,对于andrew981所说的暴光问题,我们实验有直接的暴光仪器.所以不用什么显影等暗室操作，所以这个方面我就不知道了. : )
yueban-1147 (2014-5-28 15:33:38)

我看主要是你的running buffer 的PH值或浓度会不会有问题。测测它的PH ,或者重新配置试试，
u234 (2014-5-28 15:34:22)

我跑胶的时候，也出现过这种情况，我的问题是电极缓冲液改换了，一般3次就要换，前一阵子就出现过条带弥散的情况，western没做过，不清楚了。
shenkunjie (2014-5-28 15:34:41)

请问电泳缓冲液要调PH值吗
mimili_901 (2014-5-28 15:34:59)

保险起见,电泳缓冲液应该调PH值,PH偏差大的话对电泳结果有影响.不仅如此,配胶所需要的各种试剂也应该调PH.
shenkunjie (2014-5-28 15:35:40)

不懂啦，暑假里做的都好的，开学来了以后就没好过，什么都没变啊，不知是怎么回事了，郁闷中：（