【求助】为什么胶片不能感光?

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【求助】为什么胶片不能感光?

我做western,蛋白分子量86KD,8%的胶,不过浓缩胶配好后过夜第二天用(不知有没有影响?),一抗1:1ooo过夜,二抗1:2500 2h ;ecl与HRP结合,黑暗中看得见荧光和条带,但就是胶片上什么也看不到,连膜的痕迹也没有,请教各位高手!第一次做。
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最新回复

  • INK (2014-5-28 16:01:58)


    如果你的片子没有暴光的话
    ,是否可以考虑一下显影定影的问题?
    我曾经试过,如果没有经过显影直接定影的话,片子就是非常干净的!
  • summerxx (2014-5-28 16:02:20)


    换一下显影液,定影的时候你可以打开很小的一盏红灯,看一下有没有显出来,如果还是什么都没有,就排除定影的问题。
    另外你的胶片如果是全黑的,那就是曝光了
    如果不是,可以试试在在胶片的一角用小光,微型手电什么的照一下,照的地方应该很黑,这样看看是不是胶片的问题,逐一排除
    祝好运!
  • qhyu (2014-5-28 16:02:43)


    显影液、定影液、胶片全换过了,还是不行。另外,MARker跑出来后面的都模糊了。急啊!
  • jujuba (2014-5-28 16:03:03)


    是不是显影、定影的顺序搞反了,排除后确认一下是否有胶片曝光的可能,曝光后的胶片会有一点泛绿色,这点可与阴性结果的胶片相区别。暗室内可见荧光,荧光强度如何?有时荧光弱的话需要增加曝光时间。
  • qhyu (2014-5-28 16:03:24)


    先显影,后定影,曝光时间我试着延长到一分钟,结果还是没有。会不会是ECl的问题?
  • yueban-1147 (2014-5-28 16:03:42)


    最简单的方法是直接用专门的仪器暴光,我觉得Western没直接暗室暴光太麻烦了.以前我们实验楼层的人都把浴室当暗室暴光用了,现在我们boss专门买了台30W的仪器(一般这套仪器的品牌公司价位到是30W左右,如Bio-Rad,Fujifilm),方面多了.楼上的更是买了一台400W的大的暴光仪(主要目的是用于同位素和荧光大面积暴光用的,但也可以用Western暴光).
  • pengke1983 (2014-5-28 16:04:00)

    我觉得还是你的显影液有问题,因为你在暗室看见荧光,就说明你前面的步骤都没有什么问题。还有就是你配置的显影液有别人也用过吗?做的出来吗?要不你可以试着让其他人帮你显影一下看看,也许你有某些地方弄错了,在暗室里黑黑的也不易察觉。
  • is2011 (2014-5-28 16:05:09)


    既然能在暗室内见到荧光和条带,就不会是ECL的问题。步骤没有错误,胶片曝光的情况也可以排除的话,建议更换显影液、定影液后再试试。如果显影液颜色呈咖啡色是一定要更换的。
  • linlinstar (2014-5-28 16:05:26)


    设个对照排除问题,
    1,用人家能做出来的显影定影液,排除显影液定影液的问题。
    2,直接拿一点胶片到暗室外面曝光,如经过显影定影后不能出现黑色,则是胶片的问题。
    3,。。。。。。
    这些都可以一次搞定的。准备好所有的东西(work的显影定影液,work的ecl液,自己的显影定影液和ecl液体。能见到荧光的话,最少可以保持半个小时以上。半个小时内,足够你做完所有的对照了。)如果是ecl的问题,直接用PBS洗洗再上人家的ECL就是了。
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