【求助】双向电泳中如何增加碱性区的蛋白质点

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-29 15:20 作者: join 来源: 分析测试百科网

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【求助】双向电泳中如何增加碱性区的蛋白质点

附件是我跑的2D电泳图。18cm 胶条，线性PH3－10。
蛋白质点分离的倒是比较清晰，但是碱性区的蛋白质点非常少。请高手赐教：如何在样品处理方式，以及胶条选择上来增加碱性区的蛋白质点啊？

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最新回复

greenbee (2014-5-29 15:20:58)

可以考虑用非线性的pH 4-7的胶条试试
从图中看你的蛋白大多数处于这个范围
上样量好像太大了～
染色的时间也过长
ero11 (2014-5-29 15:21:22)

哇，跑得真不错！
弱弱地问一下，那边是酸性端，那边是碱性端？分子量呢？是由上而下增大吗？
join (2014-5-29 15:21:42)

右侧是酸性端，从上至下，分子量依次增加
pencil菲 (2014-5-29 15:22:05)

一般来说碱性端蛋白不多跟3个方面有关:1,你的LYSIS BUFFER,REHYDRATION BUFFER的成分;2,胶条的选择;3,样品本身的问题.
我不知道你的样品是什么,还有你的BUFFER的配方怎么样,就不好说应该怎么改进了!
ii077345 (2014-5-29 15:25:13)

我的观点基本和楼上一致,你的裂解液成分是什么,样品在抽提时样品提取液成分?
join (2014-5-29 15:25:36)

我用的就是普通的裂解液( 8M Urea，4％CHAPS，2％Pharmalyte3-10),
rehydration buffer:（8M Urea,2%CHAPS,o.oo2%溴酚兰，0.5％Pharmalyte3-10）
提取的是细菌蛋白质
所选的胶条是18cm 线性ph3－10
提取方法就是将细菌在裂解液中超声破碎，离心去上清液，然后跑双向。
huifeng0516 (2014-5-29 15:26:04)

我也跑过双向电泳,选的胶条也是18cm 线性ph3－10,
我的组织样是肌肉组织，所以液氮研磨处理。
裂解液是: 8M尿素,2M硫脲,DTT65mM,1%IPG ph3~10,PMSF1mM
水化液： 8M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,DTT65mM,0.002%溴酚兰，1%IPG buffer,PMSF1mM
我建议你可加上硫脲试试。
plaa (2014-5-29 15:26:25)

我的电泳结果跟你的很类似,但是我认为不是硫脲的原因,因为我以前也用过含硫脲的裂解液,结果还是碱性端电少
newway (2014-5-29 15:26:45)

同意楼主的看法！文献报道硫脲有助于碱性蛋白的提取，但实际情况却不竟如人意！