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【求助】各位前辈帮我看看我的电泳图！
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最近刚跑了二维电泳，但是结果不如意呀，有很多的纵横条纹，点也不够多，不知道会是什么原因，请各位前辈指点！
蛋白从组织提取，24cm，pH 4－7，银染，上样500ug。实验过程基本顺利，就是二向电泳时速度很慢，跑了8个小时才到如图的位置。
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-29 16:28 作者: 不请自来 来源: 分析测试百科网
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最新回复
ending (2014-5-29 16:28:51)
横条纹大都是一向聚焦不好造成的，从图上可以看出你的PH值选择还是合适的，二向时间一般也很长的，我的大约6.5小时，所以8小时应该也可以，电泳缓冲液配制是否正确或者是否新鲜、温度等都可以影响电泳速度。蛋白点分离的不是很清楚，建议重复一下，如果还是如此，那可以减少上样量，严格把握平衡时间，保持各液体干净等，应该会好些。祝好运。
不请自来 (2014-5-29 16:29:10)
又做了一次，发现这次聚焦更差，聚焦程序按BIO-RADRADDEF等电聚焦推荐程序设置17cm胶条设置：
水化 50V 12h 主动水化
S1 250V 线性 30min
S2 1000V 快速 1h
S3 10000V 线性 5h（升压）
S4 10000V 快速 60000伏小时
S5 500V 快速 1h
用的是24cm的胶条，但是没有相应的protocol，所以用了17cm的方案，不知道这样有没有问题，每次聚焦效果都不好呀，不知道有么有好的改进建议？
多谢指导！
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小荷尖尖 (2014-5-29 16:29:43)
ritou1985 (2014-5-29 16:30:03)
一般光从2D胶来分析原因是很困难的,你的样品是什么,还有你的处理方法是社么?请详细一点,以便于分析!
而且24cm的胶可以将总VH延长,但一般在10万VH以下
tuuu2 (2014-5-29 16:30:20)
我觉得是你的样品问题,我开始做也是这样的,我对样品制备进行优化,结果就好了,还有对于银染你的上样量有点大,我上的是100ug.
yjf1026 (2014-5-29 16:30:36)
high abundent proteins最好处理一下
zsxan1990 (2014-5-29 16:30:53)
横纹是不是核酸的原因
windy+++ (2014-5-29 16:31:14)
楼上说优化样品具体能说一下吗？
不请自来 (2014-5-29 16:31:33)
我的样品是胎盘组织，裂解液常规总蛋白提取配方，方法：
充分匀浆，
Vortex 1分钟×4次，间隔1分钟（冰上），
静置15min（冰上）
15000转/分，20min，取上清
15000转/分，60min，取上清，分装
未经优化处理
最近又做了几块胶，减少了上样量，300ug，但效果仍不好，请指导改进措施？
另外，不知道大家有无Bio-Rad 24cm等电聚焦的protocol？
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