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【求助】谁分析一下SDS-PAGE前煮/不煮蛋白的区别？
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今天看到一篇文献，上面提到里面一个蛋白western在SDS-PAGE之前不进行煮沸，但是其他蛋白又90度3分钟
哪位大侠能帮忙分析一下这个煮和不煮的区别？
变性电泳是非得煮么？
诚心求教
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【求助】谁分析一下SDS-PAGE前煮/不煮蛋白的区别？
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-31 11:10 作者: 阿敏 来源: 分析测试百科网
最新回复
huifeng0516 (2014-5-31 11:11:14)
好像听一位大虾说过，对于温度很敏感的蛋白就不能煮，直接上样，没有问题！
阿敏 (2014-5-31 11:11:32)
直接上样变性彻底么？
如果不彻底，那泳动速度就是问题了，我怎么确定在胶上的位置啊
mamamiya (2014-5-31 11:12:51)
某些抗体识别的抗原结构，在高温下发生变性甚至解聚，因而产生假阴性结果。如我使用的一些Upstate抗体，明确要求避免过分的变性。
至于不煮是否能够保证泳东速度，我想大可放心。SDS-PAGE系统中，SDS和DTT均能够保证蛋白充分吸附负电荷，形成与分子量成正比的球状颗粒。因而泳动速度改变应该是不会发生的。
yhz1973 (2014-5-31 11:13:10)
不是有marker么？可以确定大概位置阿
这个我也没有做过，你可以实践一下
阿敏 (2014-5-31 11:13:37)
QUOTE:
你的意思是加了loading buffer之后就直接跑电泳？还是在60度或者多少度保温一定时间再电泳？谢谢
summerxx (2014-5-31 11:13:58)
有一次我没有变性Marker（pharmacia的一个Marker，说明要煮的）直接上样，跑出来的Marker也很清楚，大小也没有差别（据我肉眼观察，比较我的已知大小的蛋白）。
我一般煮沸3分钟上样。
c86v (2014-5-31 11:14:18)
我们一般65度温浴30分钟，让蛋白充分变性，而且如果你是摸索时间可以用预染Marker,电泳过程中即可看到其位置
c86v (2014-5-31 11:14:40)
我们一般65度温浴30分钟，让蛋白充分变性，而且如果你是摸索时间可以用预染Marker,电泳过程中即可看到其位置，价格比普通的Marker 贵一点，而且带形也不好，但是对于摸条件很有帮助
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