【求助】强毒性蛋白的原核融合表达

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-31 13:42 作者: bhka 来源: 分析测试百科网

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【求助】强毒性蛋白的原核融合表达

我的蛋白是杀菌蛋白，分子量很小约5000。富含精氨酸，估计是强碱性蛋白，
做了多种融合表达（TRX，KSI），换了好几个宿主菌都未表达，不知道是否还有其他的办法。
表达不出来就无法进行下一步实验，我都快决望了Sad。请各位给点意见吧。

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最新回复

bhka (2014-5-31 13:42:55)

KSI是个容易形成包含体的蛋白，按理来说我的蛋白与之融合后可以形成包含体，从而减少毒性，可是为什么还是不表达呢？？
还有没有更好的融合蛋白或疏水性更强的蛋白可以选择呢？
yysr238 (2014-5-31 13:43:11)

KSI融合表达，诱导后是否发现细菌浓度降低的现象？如果是这样的话，说明蛋白有活性表达了。如果你的蛋白是杀革兰氏阳性和阴性菌的话，我建议你采用真核表达载体，我们就曾经用Pichia酵母表达系统成功表达过抗菌肽
bhka (2014-5-31 13:43:29)

用噬菌体展示如何？操作难吗？费用如何？蛋白产量高吗？？
bhka (2014-5-31 13:43:53)

用噬菌体展示如何？操作难吗？费用如何？蛋白产量高吗？？
shkudo (2014-5-31 13:44:16)

楼上建议你用BL31(DE3)PLYS,主要适合于毒性蛋白的表达，估计你要表达是抗菌肽之类的东西吧？之前我做过，很不错的，也是原核的融合表达
okhaha (2014-5-31 13:44:35)

Maybe you try to optium the set up of expression.
(1) Choose BL21 (PLYS) strain
(2) set up different temperature for induction. Maybe 4 degree induction is better for toxic protein.
(3) set up different time of induction. 1hours, 2hours, 3hours, 4hours etc.Maybe 2-3hours is enough for expression toxic protein. Four years ago, I failed to use BL21 (pLYS) strain expressed SARS protein at 37 degree for 8-10hours. When I collected the pellet, I found the culture is clear and not turbis, it showed that the heterologous protein is toxic for DE3 strain. When this protein was expressed at 4 degree and induction 2-3hours, the band of expression protein appeared when PAGE gel was run.
bhka (2014-5-31 13:45:08)

QUOTE:
原帖由 bhka 于 2014-5-31 13:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

KSI是个容易形成包含体的蛋白，按理来说我的蛋白与之融合后可以形成包含体，从而减少毒性，可是为什么还是不表达呢？？
还有没有更好的融合蛋白或疏水性更强的蛋白可以选择呢？ ...

谢谢你的回复，我蛋白诱导后细菌浓度并没有减少，随着诱导时间增长，细菌是增加的。不知是不是说明我的毒性蛋白没有表达？？
qhyu (2014-5-31 13:45:33)

你是否可以尝试在目的蛋白的两端各加一些带负电荷的氨基酸，然后在于其它蛋白融合表达？