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【求助】请教蛋白样品怎样稀释
【求助】请教蛋白样品怎样稀释
各位大侠,我提得的蛋白浓度很高,约18mg/ml,想稀释后保存,但不知道该用什么来稀释?本来想用上样缓冲液来稀释,但听说上样缓冲液里面SDS会影响蛋白;听说有人用裂解液稀释,但我买的试剂盒,裂解液较贵;所以不知怎么办了.用蒸馏水可以吗?
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-31 15:37 作者: bongte 来源: 分析测试百科网
最新回复
njkph (2014-5-31 15:37:43)
bongte (2014-5-31 15:38:02)
我提的蛋白后续要用来做Western杂交的,后面要用TBS封闭,所以用PBS来稀释会不会影响结果呢?如果用0.9%的生理盐水稀释呢?
redbutterfly (2014-5-31 15:38:23)
QUOTE:
做WB时也需经过SDS-PAGE电泳，再有就是电泳上样
的量很少，其组成成分对后续实验的影响应该可以忽略
不计了。
生理盐水pH 的缓冲能力要弱于PBS,觉得用其稀释
蛋白不太妥当，应当防止因PH的变化引起蛋白性质的改变。
不知是否正确，供参考。
okhaha (2014-5-31 15:38:45)
用你的提取缓冲液稀释不行吗？
bongte (2014-5-31 15:39:03)
假如不稀释样品,直接按每泳道20μg的量上样可以吗?例如,蛋白浓度为10mg/ml,那就加2μl的样品,再用18μl的上样缓冲液补足到20μl.但不知这样会不会因为上样缓冲液加得太多而影响电泳结果?
xueyouzhang (2014-5-31 15:40:02)
QUOTE:
可以的 有时候上样就这么上的亚 再说你上面说的SDS会影响蛋白 的说法 是怎么影响呢 ? 如果跑sds-page 的话上样前要100度变性的 ,加入缓冲液保存后的样品 从冰箱拿出来上样前要100度变性后在上样 ,这一点在郭 君的蛋白质电泳书上有写的babybabe (2014-5-31 15:40:19)
我电泳的时候，如果样品中蛋白浓度很大，上样量就很少，加2ul也是常有的事，即使不补上样缓冲液也没有问题，跑出来的条带一样很好
不过，如果你不放心，怕跑歪，可以补充些上样液，量多少要看多大的梳空了，一般20ul没问题，不溢出来就可以。
稀释样品要看后期做什么用了，一般用PBS就可以。要是不放心，看看裂解液中用的什么缓冲成分，是Tris还是PBS，用相应的即可。
仅供参考！
junjie05 (2014-5-31 15:40:36)
我觉得这种情况完全可以不用稀释保存呀
分装保存，实验的时候
减少上样量或者再稀释就可以了
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