【求助】蛋白质样品如何浓缩？

最新回复

• panda王 (2014-6-14 16:43:11)

  用冻干仪，保持低温，进行浓缩。
  真空干燥温度过高，蛋白易降解

• hulu呼噜 (2014-6-14 16:43:57)

  
  谢谢。请问这样处理对后续WESTERN BLOT有没有影响？

• caihong (2014-6-14 16:47:07)

  
  样品置于透析袋中，外面撒聚乙二醇20000，可达到浓缩效果，并注意控制低温。应该对WESTERN BLOT没有影响。

• tuuu2 (2014-6-14 16:47:33)

  
  透析法（配合聚乙二醇）的确有经济效率又高。但存在蛋白被修饰的问题。

• toy (2014-6-14 16:48:01)

  
  可以用TCA方法浓缩，或者丙酮等浓缩，硫酸铵沉淀。TCA的一个好处是可以去处一些杂质，对Western没有影响的。可以参考：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3365549_1.html')

• changlhsyo (2014-6-14 16:48:36)

  
  常用的蛋白浓缩方法如下：
  1 硫酸铵沉淀法
  2 有机溶剂沉淀法（丙酮，乙醇）
  3 聚乙二醇沉淀法
  4 超滤法
  5 透析法
  6 冷冻干燥法
  如果样品的量比较多，采用前3种方法较为经济实用。
  样品量较少可以采用后3种方法，较为适宜，其中透析法，简单方便，至于超滤吗，这种方法很好，我们做过，效果不错，就是仪器贵了点，millipore的超滤仪将近3万，呵呵。还有那种millipore 的那种小的离心管也可以用于浓缩，或分离，据说也不便宜。冷冻干燥方法也不错，有条件的话，不失为一种蛋白浓缩的好方法，活性保持的较好。

• ritou1985 (2014-6-14 16:48:59)

  相对来说超滤比较快，比较温和， 且能除掉一些小分子的杂质。但超滤膜的孔径和材料要选好。

• moonlight45 (2014-6-14 16:49:21)

  
  硫酸铵沉淀，透析和超虑方法我都用过！硫酸铵沉淀后得脱盐，透析方法不错，但我觉得如果条件允许，超虑最好，可以出去很多杂志，起到一定的分离春还左右作用!millipore的超虑管很好用，不过像楼上说的，孔径和材料一定选好，孔径太大会丢失你的目的蛋白。不过有了超虑管，不需要超虑仪，普通的离心机就ok了1!

• seven7 (2014-6-14 16:49:41)

  
  millipore的比较好用，上网能查到在各大城市的代理商电话。如果样品比较少，用超滤离心管，选好孔径就可以了；如果样品比较多，用超滤膜或膜包，样品一定要先用0.45um的微孔滤膜过滤，否则很容易堵的

• applebook=213 (2014-6-14 16:49:58)

  
  最好就是冻干，但是冻干后，样品有可能粘在冻干瓶壁上，损失可能较大，建议用PEG6000反渗透浓缩，但是PEG6000可能透过透析袋混入样品，因为透析袋的最小截留分子量是8000左右，至于PEG6000可不可以进去或者对样品有没有影响就不知道啦！

• applebook=213 (2014-6-14 16:50:30)

  最好不要用超虑，因为超虑的压力较大，可能导致蛋白质变形，而且损失也较大。

• 3648755 (2014-6-14 16:51:18)

  
  样品少的话，可以选择微量的浓缩离心管，millipore和pall都有卖的，比较好用。如果体积特别大，可以考虑用盐析的方法，然后脱去硫酸铵。透吸袋用PEG反渗透浓缩速度也比较快，不过PEG最好选择比你的截留分子量大3倍以上的比较保险。另外，不知道你考虑没有离子柱浓缩也是不错的选择，对蛋白的活性等都不会影响。祝你好运