【求助】蛋白质提取疑惑

最新回复

• prettygirl@ (2014-6-14 18:15:17)

  
  是不是海马组织大分子量蛋白含量比较少的原因，请大家帮忙，很着急。谢谢

• prettygirl@ (2014-6-14 18:16:06)

  
  请 问大家蛋白质 提取后的浓度多高比较好，我提的蛋白质浓度2－3毫克/毫升，有人说浓度太低了，但是也有人说还可以，到底多高比较好。如果浓度低的话，怎么办？？？？

• ha111 (2014-6-14 18:16:58)

  海马组织不是很清楚
  至于浓度,我认为还可以,但是得看你目的蛋白的表达量啊
  如果需要纯化的话,tca 丙酮法就可以了,找一篇经典文章看一下就可以了
  good luck!!!!

• ending (2014-6-14 18:17:19)

  
  基本上蛋白质浓度应该够了，会不会是转膜时出问题？你可以是一下将膜及转过膜的胶一起染色，看看是不是转膜的问题。两个一起用马斯亮蓝染色应该就可以。

• eric930 (2014-6-14 18:18:09)

  
  我觉得你提取的蛋白浓度已经很浓了，你可以先将蛋白电泳，然后银染，观察是否有大分子蛋白，如果有的话，在提高上样量来做WB.

• prettygirl@ (2014-6-14 18:18:51)

  
  谢谢！但是我发现染色总是条带很淡，不敢往下做。

• eric930 (2014-6-14 18:20:12)

  
  有可能是海马组织蛋白含量较少的原因,
  可以尝试检测一下管家基因的的水平,如果水平还可以的话,那就有可能是你的目的基因的丰度比较低, 可以增加上样量看看.

• prettygirl@ (2014-6-14 18:20:59)

  
  我曾经做过管家基因蛋白，条带很浓，但是大分子蛋白条带很淡。

• jkobn (2014-6-14 18:21:32)

  
  你用的多大浓度的胶啊
  试一试低浓度的分离胶

• xue258 (2014-6-14 18:22:34)

  
  可能你的分离胶浓度有问题，建议使用8%的分离胶