【求助】PVDF膜转膜多久？

最新回复

• zsxan1990 (2014-6-26 16:53:02)

  
  转多久要看你目的蛋白分子量大小、你用的电压或电流大小
  预染marker按正常量加就可以了，它的说明书上应该有建议用量。
  转膜透到滤纸上，不会是你把膜和胶的位置放反了吧，应该是膜靠近阳极，胶靠近阴极一侧，仔细检查一下吧。
  一般如果安装正确的话转膜是没有问题的

• 我佛慈悲 (2014-6-26 16:53:22)

  我的分子量是6.6KD,PVDF(0.2)请问楼上的兄弟转膜需电压和时间?

• qqq111 (2014-6-26 16:57:39)

  
  6.6的分子量比较小，我也跑过但是很难跑出来，据说是因为分子量小所以蛋白提取较困难，在裂解过程中很容易降解损失。至于转膜这么小的分子量一般230v 一个小时就够了。如果低电压就相对时间长一点。

• summerxx (2014-6-26 16:58:06)

  
  我们实验室的0.2um的hsp,220v,我一般用1个小时左右就可以了,你可以试一下.

• qhyu (2014-6-26 16:58:22)

  
  请教一下我的蛋白分子量是29KD，用湿转法做的，100V条件下转膜45min，PVDF膜，甲醇预处理1min，再放入缓冲液中平衡15min，但是目的条带不是很清楚，而且是放在常温下转移过程中用冰盒降温。是否转移过程中应该要放在4度冰箱中呢？另外缓冲液是否可以回收？我用的是甘氨酸缓冲系统的，是否应该每次现配时加入甲醇配成终浓度20％呢？谢谢！！

• tuuu2 (2014-6-26 16:58:45)

  
  甲醇处理15S就够了，转移时不用放入冰箱，除放入冰盒外预先把转移缓冲在4度冷藏一会，缓冲液补要多次回收，缓冲液我一般加20％甲醇，条带补清楚补一定是转移时出问题，可能跑胶时就出问题了，可以预先染色看一下

• 了了 (2014-6-26 16:59:08)

  6.6的分子量比较小，我也跑过但是很难跑出来，据说是因为分子量小所以蛋白提取较困难，在裂解过程中很容易降解损失。至于转膜这么小的分子量一般230v 一个小时就够了。如果低电压就相对时间长一点。
  我有个疑问，这位战友转6.6大小的蛋白用230v转1小时么？是不是笔误？这个电压是不是太高了？

• xiaoxiaoniao (2014-6-26 16:59:33)

  
  同意楼上。。230v。。早跑过了！