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PP-HPLC无法分开

字体: 小中大 | 打印发表于: 2010-9-29 10:35 作者: 86269480 来源: 分析测试百科网

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PP-HPLC无法分开

研究对象是动物组织的一种分子量约为10KD的蛋白（通过SDS-PAGE检测判定的分子量，尚未鉴定无法确定该蛋白是否有报道），具体分离纯化过程所用的是酸性缓冲液，目的是通过RP-HPLC纯化得到高纯度的样品进行鉴定。有空白运行梯度排除了梯度峰，Simadzu VP-ODS C18,4.6×150mm ,5μm柱子。1ml/min 流动相A:0.1%TFA 水溶液，流动相:0.08%TFA 乙腈溶液。10%A 平衡5min,30min内梯度到60%B。延长梯度时间、更换长柱子均无法得到很好的分离。改善梯度条件（在10%A 平衡5min,55min内梯度到60%B，90%B 5min 10%A 5min）峰型同前，降低进样浓度，换长柱子也没有改善。

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最新回复

ouoje (2010-9-29 17:14:19)

有图吗，上个图看看吧^_^
sacred (2010-9-29 17:15:04)

5~55min的梯度变化才10%~60%么。，会不会是梯度变化太慢可以10min 或者5min变换速度吧，蛋白没做过我只是以前这样做过的
maomi530 (2010-9-29 17:15:19)

你的柱子的孔径太小了。对于大于10000Da的大分子样品，选用15nm的大孔径柱子比较适合。
aspoul (2010-9-29 21:37:29)

QUOTE:
原帖由 maomi530 于 2010-9-29 17:15 发表
你的柱子的孔径太小了。对于大于10000Da的大分子样品，选用15nm的大孔径柱子比较适合。
同意楼上，手头如果没有大孔径柱，试试其他固定相的，比如C8
santa (2010-9-30 13:43:54)

用RP-HPLC的保留时间是多少，能用GPC吗？
ouoje (2010-9-30 13:44:07)

那你换一种填料的珠子呢？是不是这种填料不适合？
qianxiang23 (2010-10-06 15:44:39)

10KD的大分子用C18好像不合适
建议换成C8或者C4的柱子可能会好些