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【求助】western blotting的一抗用什么溶液稀释?

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-7-02 16:15    作者: whitesheep    来源: 分析测试百科网

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【求助】western blotting的一抗用什么溶液稀释?

我买的蛋白一抗是干粉，请问做western blotting的时候一抗用什么溶液稀释呢?请哪位好心人赐教个buffer的配方．万分感谢！
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最新回复

  • eric930 (2014-7-02 16:15:40)

    pbs就可以了
    分装后冻于零下70

  • junjie05 (2014-7-02 16:15:58)

    最简单、最正确的方法就是看说明书，楼主买的抗体不会没有说明书吧。一般来说，PBS就可以。看了一下我的抗体，几个都是：Each vial contains *ug in 1 ml of PBS with <0.1% sodium azide and 0.1% gelatin.

  • whitesheep (2014-7-02 16:16:19)


    PBS中要加脱脂奶粉吗?还是单纯PBS就行.我的抗体是别人留下来的,说明书没了.

  • remenb (2014-7-02 16:16:35)


    我用TBST也可以的。也有书上说用封闭液溶的

  • fox_79 (2014-7-02 16:17:15)

    PBS中要加脱脂奶粉吗?还是单纯PBS就行.我的抗体是别人留下来的,说明书没了.

    ========

    不加.

  • huifeng0516 (2014-7-02 16:17:36)


    我想楼主有点混淆了。你的抗体是干粉，先要溶解，分装。通常会有说明的，一般用PBS加20％甘油和0.05% sodium azide溶解就行。在做western的时候，你分装的抗体要用你的封闭液来（通常用含5％脱脂奶粉的PBST或TBST）稀释。

  • duoduo (2014-7-02 16:31:14)

    建议用含1%BSA或有脱脂奶的pbs溶，因为BSA或脱脂奶在溶液中对抗体一方面起保护作用，另一方面，塑料容器对蛋白有吸附作用，溶液中加入蛋白成分可减少对抗体的吸附，如果有，可加一些叠氮钠，浓度0.01%左右，起防腐作用，但叠氮钠有剧毒，使用时一定要小心。

  • mamamiya (2014-7-02 16:31:40)


    western blotting的一抗与靶蛋白结合时的终浓度应该是多少？
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