【求助】关于Trizol 法提取蛋白

最新回复

• zsxan1990 (2014-7-02 17:09:25)

  
  我建议你不要用这种方法,操作易出问题,效果也不好,不如单提,我以前试过,效果非常差

• toy (2014-7-02 17:13:07)

  谢谢
  请问您有什么好方法吗?

• zsxan1990 (2014-7-02 17:14:40)

  
  看你用于什么目的的，普通WB测表达，用RIPA，之前临时加PMSF就可以了

• toy (2014-7-02 17:15:08)

  
  我是想提取全蛋白用于双向电泳，材料是一种没有细胞壁得粘菌

• ero11 (2014-7-02 17:15:44)

  
  trizol提取的蛋白很难溶解 说明书倒是有protocol,

• zsxan1990 (2014-7-02 17:17:13)

  
  我没有做过细菌的,不过实验室有人做,他用的是专门提细菌的,你查一下文献,看人家用什么吧

• tangxin_80 (2014-7-02 17:17:41)

  
  Trizol 法提取蛋白
  1 向一个14ml的无菌试管中加入100-500mg的组织
  2 向每100mg的组织中加入1ml的trizol试剂
  3 用DEPC水清洗匀浆器三次，每次用5ml
  4 搅匀样品两次每次10秒钟
  5室温放置5 分钟，让碎屑沉淀
  6 取1ml的上清转移到一个2.2ml的试管中
  7 加入0.2ml的氯仿/mltrizol，将盖子盖上，混匀15秒
  8 静止室温5分钟液相分离
  9 4度12000rpm×15分钟离心
  10 转移全部的上层水相（大约700微升）
  11 沉淀DNA，使用0.3ml无水乙醇/1mltrizol
  12 颠倒混匀室温放2-3分钟
  13 4度 2000rpm离心5分钟沉淀DNA，放置于新试管重复一次
  14 将含有蛋白质的上清（约600微升）防于新的试管中
  15 加入1.5ml的异丙醇
  16 室温放置10分钟。4度离心12000rpm 10分钟
  17 使用95%乙醇配制的0.3M的盐酸胍2ml，洗涤3次，每次洗过放置室温20分钟
  18 4 度 7500rpm离心5 min
  19 无水乙醇漂洗两次，每次用2ml，静制RT20分钟离心同上
  20 吸出上清真空干燥，用1%SDS溶解
  21 溶解后4度10000rpm离心10分钟，沉淀杂质，放入新的离心管。