【求助】蛋白质的存放

最新回复

• mamamiya (2014-7-02 17:26:59)

  
  蛋白降解是很难的
  这里要提到两个概念
  降解与失活
  降解是就一级结构而言的 肽键断开才是蛋白质的降解 一般来说仅仅温度的变化很难加速这一过程
  而失活则意味着 空间结构的变化 大多数蛋白的活性都与温度相关
  如果你想知道其降解程度 那我认为是 不必担心
  我想你关心的 应该是活性问题 冻融对于蛋白活性会产生很大的影响

• ending (2014-7-02 17:27:19)

  请问煮后的蛋白，还是原来的蛋白吗？我看有的文献上说，煮后蛋白会分解成亚基，若是这样，跑的蛋白就是亚基了，是这样吗，谢谢

• gogo (2014-7-02 17:29:00)

  小弟粗提了一类蛋白质，小部分在-20下放了一个多月，中间有几次冻融，大部分在-30下放了近两个多月，中间只冻融一次，现在开学又想拿来实验，请问这两种条件下特别是-30下的蛋白质的讲解程度如何？还能不能继续实验？多谢！
  
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  一般来说，这种条件下活性会降低很多
  15－30％甘油，－80度冻存可保存半年，当然冻干粉时间更长

• bring (2014-7-02 17:29:29)

  楼上说的很对，储存的蛋白还能不能用取决于你的目的，如果你想测某种蛋白的表达，冻融几次的蛋白没问题可以用，我想我们大家也都是这样用的。但如果你想测蛋白的活性，会有很大的影响，但也不是不能用，在相同的条件下蛋白活性的降低比例是相似的，如果你是比较同样保存的蛋白的活性，你的蛋白也可以用，但此时只适合比较。蛋白的活性会随时间降低的，不仅是冻融，如果你测的是活性，最好每次都应该用新鲜标本。

• fangxiang (2014-7-02 17:29:51)

  多谢各位！我主要是用于活性检测。由于是刚入手做，准备有些不足，看来以后也要好好下下功夫了！

• glass (2014-7-02 17:30:22)

  请问煮后的蛋白，还是原来的蛋白吗？我看有的文献上说，煮后蛋白会分解成亚基，若是这样，跑的蛋白就是亚基了，是这样吗，谢谢
  
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  这个问题 也要从概念说起来
  亚基 一个亚字 表明了一种层次关系 也就是空间结构中三级与四级的关系
  对于由多亚基构成蛋白分子的sdspage样品处理 无论是加入sds还是煮沸 都应该会导致 亚基之间的次级键被破坏 所以电泳结果不能观察到完成分子大小的条带
  需要指出的是 二硫键是一种较强的次级键 dtt类的还原剂能使其断裂 仅仅sds或煮沸都不行

• bamboo16 (2014-7-02 17:32:25)

  
  最好开始就分成小管，用一点取一点。

• qqq111 (2014-7-02 17:32:43)

  
  对蛋白质的存放有以下几个原则:
  1. 避免反复冻融. 反复冻溶对蛋白质的损伤特别大.
  2. 高浓度保存. 一般来说浓度越高保存的时间越常, 干粉比溶液更稳定.
  3. 分装. 根据试验尽可能把分装的量定为一次试验能够用完.
  4. 温度的选择. 冷冻时选择-40度以下比较稳妥.