【求助】关于2D胶图横条纹（PH4-7，17cm，银染）

最新回复

• gogo (2014-7-04 17:06:41)

  你的图水平横纹比较多，可能的原因及解决办法：
  1 等电聚焦不充分，应该延长等电聚焦的时间，可以使用高电压以便取得良好的等电聚焦效果，不过我觉得你的程序的额定电压已经足够了，这个可能性不大；
  2 过度等电聚焦能够造成电渗和蛋白质飘移，应该减少等电聚焦的时间；建议你检查一下你聚焦的时间，如果发现>16h，那么就不太妙
  3 蛋白质样品中含有离子，或离子型去污剂如SDS，应该将水化液的离子浓度控制在10mmol/L 以内，可以采用透析、层析等方法脱去离子，
  或使非离子型去污剂的浓度至少8倍于SDS的浓度；
  4 离子等杂质影响等电聚焦，应该除去样品中的杂质，如脂类，淀粉，你的是肿瘤组织，也许含脂类比较多，可以试试用非极性的溶剂去除
  good luck

• yhz1973 (2014-7-04 17:07:08)

  一个原因，这一端没有平衡好！

• 小游abc (2014-7-04 17:07:36)

  
  非常感谢两位站友的指点！
  我用的是TCA/丙酮过夜，丙酮洗沉淀两次，各两小时。不知去除杂质是否够好，是否还有可以改善的步骤。
  一向预定时间为25.5小时，实际约28小时，共95000Vhr。实际聚焦时间约15小时。
  二相平衡时我用的是各12分钟。胶条没有滑出水化盘。
  不知还有什么步骤有问题？
  多谢指教！

• gogo (2014-7-04 17:07:58)

  
  还有一点，注意吸干胶条上的水分
  如果你重复了几次，还是这个结果，那么你的样品预处理就应该注意了，具体的可以参照以下的文献：

• xyw5 (2014-7-04 17:08:25)

  
  相关疾病：
  肿瘤
  我想请问一下laobai ，你的肿瘤组织中看上去似乎没有什么非常明显的高丰度蛋白，你是否采用了什么去处高丰度蛋白的方法？我也在做肿瘤的蛋白质组学，里面有几种很高丰度的蛋白，约占50%，不知道应该怎么减小影响呢？

• 小游abc (2014-7-04 17:09:13)

  我再摸摸条件吧！
  关于楼上站友的问题，我的上样量为50ug，我上1mg考染的胶图也有非常明显的高丰度蛋白。考虑减少上样量会好一些。

• qianqin1977 (2014-7-04 17:09:39)

  
  你的胶很明显就是阴极漂移的问题了，看了下你的聚焦条件，发现可能是聚焦时间过长，而且总伏时也比较多了，工作手册就推荐不要超过85000伏时。建议1000V过了之后5000V快速聚焦3个小时，再用10000V快速聚焦6-70000伏时就OK了。