最新更新主题

月度关注热点

【转帖】【分享帖】不轻易外传的经验

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-8-19 16:43    作者: ujne    来源: 分析测试百科网

查看完整版本请点击这里：
【转帖】【分享帖】不轻易外传的经验

不轻易外传的经验



如果我不说，你知道吗？

大家都清楚普通C18的色谱柱pH使用范围大约在2～8之间，那么要长期使用的流动相中缓冲液的pH值偏碱，你会怎样延长色谱柱的使用寿命？

下面来说说我是怎样发现这个秘密的。

那是好几年前的事了，做的是三磷酸腺苷二钠注射液的课题，当时领导催得急，时间紧任务重，可是屋漏偏逢连阴雨，色谱柱三天两头地出问题，这是什么原因呢？

先介绍一下三磷酸腺苷二钠的色谱条件：

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.2mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠35.8g，磷酸二氢钾13.6g，加水900ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入四丁基溴化铵1.61g，加水至1000ml，摇匀）-甲醇（95:5）为流动相；柱温为35℃；检测波长为259nm；理论板数按三磷酸腺苷二钠峰计算应大于1500；各色谱峰的分离度应符合规定。出峰次序依次为一磷酸腺苷钠、二磷酸腺苷二钠与三磷酸腺苷二钠。

如此浓的的缓冲盐，如此少的有机相，什么色谱柱能受得了啊。于是我英明地决定用以前别人报废的色谱柱，进行了适当的修补，用它来做这个不讨人喜欢的课题。刚开始做的图谱不错，柱效也很高。可是没用几天就不行了，柱效下降得很快，峰高几乎到了原来的一半，我还以为是盐太浓色谱柱污染了，于是清洗柱塞板，换柱头填料，忙活了半天没起什么作用。痛苦啊！

在煎熬中思索，忽然灵机一动，是不是因为缓冲盐的pH值偏高，色谱柱耐不住。于是想到用pH3.5的甲醇水（甲醇-水（20:80）用冰醋酸调节pH至3.5）来冲洗色谱柱，结果色谱柱的柱效恢复了，一些又正常了。

这样每次做完试验，我先用5%的甲醇水冲洗系统，再用pH3.5的甲醇水（甲醇-水（20:80）用冰醋酸调节pH至3.5）冲洗色谱柱约40分钟，然后再用甲醇水冲洗系统，最后用甲醇保存，就这样我的课题在规定的时间内OK了。

这个经验算不算宝贵财富呢?
查看完整版本请点击这里：
【转帖】【分享帖】不轻易外传的经验

我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • 耗子=== (2014-8-19 16:43:46)

    恭喜一下。 酸液冲洗，效果不错的，特别是针对具有缓冲盐的体系。但是不一定要每次都洗，定期就可以了。 我以前定期用0.05%的磷酸液—甲醇/乙腈冲洗柱子的，效果还不错。

  • flower@@ (2014-8-19 16:44:07)

    恭喜楼主！ 一切自己的实际经验都是宝贵的财富。。 不过现在好多碳18色谱柱能够耐受pH1-12了。

  • ujne (2014-8-19 16:44:27)

    呵呵，主要是用的流动相太特殊了。

  • ujne (2014-8-19 16:44:47)

    虽然好多碳18色谱柱能够耐受pH1-12，但酸碱性太强还是易损坏色谱柱。

  • gogo (2014-8-19 16:45:34)

    谢谢分享。

    不知道这样做的机理是什么呢？

  • 969 (2014-8-19 16:45:53)

    我一般用0.05M的硫酸冲，效果也很好。

  • ujne (2014-8-19 16:46:15)

    流动相的pH值过高会溶解硅胶，造成色谱柱塌陷。

  • ujne (2014-8-19 16:46:42)

    0.05M的硫酸是不是酸性太强了？
查看全部回复 我也来说两句
查看完整回复请点击这里：
【转帖】【分享帖】不轻易外传的经验