【求助】引物退火温度

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-8-27 15:09 作者: skytree 来源: 分析测试百科网

我们之前用的上海生工的M13引物，这次换了一家。之前生工的M13引物的退火温度是54和52度。这次这家给我们提供的M13引物退火温度是51和49度。我想问问，同一种引物，不同公司合成的，退火温度就会不同吗？碱基序列都是相同的啊？为什么退火温度会不同呢？

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【求助】引物退火温度

bojitu (2014-8-27 15:10:15)

不同公司，不同分析软件计算引物Tm值时使用的公式不同，所以标示的Tm值不同，只要序列一样，Tm值是一样的。
skytree (2014-8-27 15:10:36)

QUOTE:
原帖由 bojitu 于 2014-8-27 15:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

不同公司，不同分析软件计算引物Tm值时使用的公式不同，所以标示的Tm值不同，只要序列一样，Tm值是一样的。
好的，那我是不是要自己根据序列计算这个引物的退火温度呢？
u76mp (2014-8-27 15:11:00)

我觉得还是做一组实验吧梯度降温看效果吧那个好点用哪个
bongte (2014-8-27 15:11:21)

M13退火温度一般为55~60度。
skytree (2014-8-27 15:11:46)

QUOTE:
原帖由 bongte 于 2014-8-27 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
M13退火温度一般为55~60度。
我们之前一直用的是53度，下次试试把温度提高吧！可是这次的引物建议的退火温度很低，在50度
nut6694 (2014-8-27 15:12:33)

退火温度是要摸索的，公司给的值只是作为参考的
fangxiang (2014-8-27 15:12:51)

计算方式不一样，不过如果通用引物的话，用起来问题应该不会太大
caihong (2014-8-27 15:13:10)

公司的只是参考值，实际的数值还得自己摸索

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