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【求助】大肠杆菌表达重组蛋白
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发表于: 2014-8-29 16:47 作者: BUK 来源: 分析测试百科网
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【求助】大肠杆菌表达重组蛋白
大肠杆菌表达胸腺素六串体,工程菌已构建好,复苏扩增的时候,SDS-PAGE可确认目的蛋白的表达,但是一进行大规模的培养(上发酵罐)----80L,就发现蛋白表达几乎是为零,请问各位大师问题会出在哪里?
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【求助】大肠杆菌表达重组蛋白
我也来说两句
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最新回复
jujuba
(2014-8-29 16:47:57)
给你推荐个“笨”方法:复苏扩增时显示有表达,说明菌株没问题,但是放大后不表达(终点?),可以通过扩大过程中分步收集留样检测,来判断哪个过程出现了丢失。一般的可能性是工程菌株不稳定。
喵咪
(2014-8-29 16:48:16)
发酵过程补料对表达影响很大,如果有诱导剂,诱导剂的加入时间也决定表达量的多少
utt0989
(2014-8-29 16:48:33)
同意楼上,一般先用摇瓶和小罐进行发酵条件优化,最后放大到大规模发酵。
feima+
(2014-8-29 16:48:51)
你构建出来,跑了SDS看有产品就没有进行小试的研究吗?
ending
(2014-8-29 16:49:07)
朋友,小试没有经过中试放大慢慢摸索就想一步到位么?
leifengta
(2014-8-29 16:49:22)
上面都很专业啊,确实要进行各种优化的
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jujuba (2014-8-29 16:47:57)
给你推荐个“笨”方法:复苏扩增时显示有表达,说明菌株没问题,但是放大后不表达(终点?),可以通过扩大过程中分步收集留样检测,来判断哪个过程出现了丢失。一般的可能性是工程菌株不稳定。
喵咪 (2014-8-29 16:48:16)
utt0989 (2014-8-29 16:48:33)
同意楼上,一般先用摇瓶和小罐进行发酵条件优化,最后放大到大规模发酵。
feima+ (2014-8-29 16:48:51)
你构建出来,跑了SDS看有产品就没有进行小试的研究吗?
ending (2014-8-29 16:49:07)
朋友,小试没有经过中试放大慢慢摸索就想一步到位么?
leifengta (2014-8-29 16:49:22)
上面都很专业啊,确实要进行各种优化的
【求助】大肠杆菌表达重组蛋白