【求助】POROS A 20测定抗体表达量遇到的问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-8-29 17:01 作者: kuaizige 来源: 分析测试百科网

本人在实验中遇到一个问题，在用POROS A 20测定抗体表达量的时候，平衡缓冲液用PBS，洗脱缓冲液用ph2.5的柠檬酸缓冲液，有没有虫友做过类似的实验，1）在制作标准曲线时，由于两者缓冲液不一致，导致基线不一致，这样的峰面积积分出来是否准确呢，2）在柱子用了一段时间后，每次走样品的峰面积不是很固定，相差挺大的，是什么原因呢，有没有什么解决办法，谢谢，3）测定抗体表达量的标准品一般用什么做标准品，能用市售品做标准品吗？市售品需要标定吗，谢谢各位大虾

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【求助】POROS A 20测定抗体表达量遇到的问题

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junhun (2014-8-29 17:01:52)

基线不稳，不能怪柱子。我就曾遇到过，因为水和缓冲盐，造成的基线不稳。建议上针空针，看看基线有多不稳定，基线什么的跑不稳，就先别谈定量什么的，肯定不准。
ilovegaga (2014-8-29 17:02:10)

1）如果是缓冲液的差异，考虑置换标准品的缓冲液？
3）如果是仿制药，用原研做标品。如果新抗体用Fc区一致抗体作为标品的就行吧
uaubc (2014-8-29 17:03:37)

如果法定标准品不可获得，可以暂时用商业化标准品。
但是，最后或者购买法定，或者自制并鉴别、标定工作标准品。
kuaizige (2014-8-29 17:03:53)

谢谢，，各位大虾看看我这个标准品跑出来的图，这个基线应该是由A与B缓冲液不一样，导致的吧，2-6min的时候用缓冲液洗脱的大家有没有遇到这样的问题？

37686101.jpg
kuaizige (2014-8-29 17:04:29)

基线不稳，不能怪柱子。我就曾遇到过，因为水和缓冲盐，造成的基线不稳。建议上针空针，看看基线有多不稳定，基线什么的跑不稳，就先别谈定量什么的，肯定不准。

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基线是稳的，但是洗脱之前与洗脱之后两者基线不一致，怎么办？有影响吗？

99606741.jpg
daod (2014-8-29 17:04:47)

标准品和样品均是同一效果，图谱接近，那应该就没问题吧。因为你是通过标准品的标曲回算出样品浓度，只要谱图米有差异，那么面积的由来还是准确，有外推意义的。你得叠图看看样品与标准品的基线处是否重合
yjf1026 (2014-8-29 17:05:06)

POROS A的说明书，想必lz没有仔细看清楚。。。
baseline shift要解决必须换缓冲液，柱子要清洗，说明书上有方法，点到即止。
kuaizige (2014-8-29 17:05:24)

QUOTE:
原帖由 yjf1026 于 2014-8-29 17:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

POROS A的说明书，想必lz没有仔细看清楚。。。
baseline shift要解决必须换缓冲液，柱子要清洗，说明书上有方法，点到即止。
您好，是两者的盐浓度要一致吗，可不可以多点一点，我还是很困惑
uaubc (2014-8-29 17:08:17)

在此问一下：抗体表达量测定一般用的什么柱？有用SEC，也有rProteinA；POROS A 20还是第一次听说。有高手帮忙解答吗？
uaubc (2014-8-29 17:13:06)

多谢，那POROS A/20柱子的寿命怎么样？后期会不会导致测得不准？