【求助】做荧光定量时的cDNA不用调整使得浓度一样吗？

最新回复

• youreyes (2014-8-30 16:54:44)

  
  cDNA不用特意调浓度的，跑目的基因的时候还得跑一个内参基因，分别得到Ct值，然后用2^(-△△CT)即可求得相对定量

• fangxiang (2014-8-30 16:55:15)

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  原帖由 youreyes 于 2014-8-30 16:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  cDNA不用特意调浓度的，跑目的基因的时候还得跑一个内参基因，分别得到Ct值，然后用2^(-△△CT)即可求得相对定量

  大侠，我正在用此方法处理数据，我想请教下，这种方法处理的时候，我是不是要将未处理样品的表达量化为1再分析啊？！谢谢啦！纠结很久了。有人说直接用仪器算出来的表达量，但是我看文献，好像做对比的那个值都是1啊！！
  

• feima+ (2014-8-30 16:55:43)

  QUOTE:

  原帖由 youreyes 于 2014-8-30 16:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  cDNA不用特意调浓度的，跑目的基因的时候还得跑一个内参基因，分别得到Ct值，然后用2^(-△△CT)即可求得相对定量

  大侠，请教一下，做荧光定量实验，用2^(-△△CT)法之前，扩增目的基因和内参基因的标准曲线要不要做啊？

• youreyes (2014-8-30 16:56:19)

  QUOTE:

  原帖由 fangxiang 于 2014-8-30 16:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  大侠，我正在用此方法处理数据，我想请教下，这种方法处理的时候，我是不是要将未处理样品的表达量化为1再分析啊？！谢谢啦！纠结很久了。有人说直接用仪器算出来的表达量，但是我看文献，好像做对比的那个值都是1啊！！
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  如果是相对定量不用做标准曲线的，如果怕一个内参不准可以多选几个内参基因跑跑看

• youreyes (2014-8-30 16:56:37)

  QUOTE:

  原帖由 feima+ 于 2014-8-30 16:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  大侠，请教一下，做荧光定量实验，用2^(-△△CT)法之前，扩增目的基因和内参基因的标准曲线要不要做啊？

  你用个计算方法算出来的数值作对比的数值本来就是1啊，对照组的△△CT是个接近于0的数，放在指数上最后得的值就是

• youreyes (2014-8-30 16:56:57)

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  原帖由 feima+ 于 2014-8-30 16:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  大侠，请教一下，做荧光定量实验，用2^(-△△CT)法之前，扩增目的基因和内参基因的标准曲线要不要做啊？

  相对定量是算不出表达量的，只是认为内参在处理前后表达不变，目的基因在处理前后表达量有变化，所以用目的基因的Ct值减内参基因的Ct值，就能看出表达水平的升降变化。

• chuntian1983 (2014-8-30 17:04:41)

  相对定量是算不出表达量的，只是认为内参在处理前后表达不变，目的基因在处理前后表达量有变化，所以用目 ...
  
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  我用的是仪器算出来的数据，但是我发现好像没有归一化，我的正常处理样品和胁迫下样品都是有一定的表达量倍数，我是不是应该将正常处理样品的ct值处理成1，然后看胁迫后的样品基因的上下调？图片是我样板设计。