【求助】基因组有条带，但是扩增时没有条带，求解

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-9-01 15:54 作者: 幽兰君来源: 分析测试百科网

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【求助】基因组有条带，但是扩增时没有条带，求解

各位大侠求指点，DNA跑胶如下，5份样本，但是5号在用ITS1/4扩增后没有条带，其余4个都可以；后来又把5号模板稀释2倍，5倍，10倍后在扩增，还时没有条带，是模板浓度太高还是别的因素的影响，求分解~~~

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最新回复

leifengta (2014-9-01 15:55:15)

跟稀不稀释没关系，摸索一下你的扩增条件，主要是退火温度
幽兰君 (2014-9-01 15:55:39)

QUOTE:
原帖由 leifengta 于 2014-9-1 15:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

跟稀不稀释没关系，摸索一下你的扩增条件，主要是退火温度
扩增的ITS序列，引物也在一直用着，一直是55度，一锅做的，其余4个顶好，就这一个了
leifengta (2014-9-01 16:01:38)

从DNA胶图看出，模板是没有问题。五个孔用的引物都一样吗？能否把扩增胶图附上，以方便进一步分析？
zwsyrt (2014-9-01 16:02:03)

QUOTE:
原帖由 幽兰君 于 2014-9-1 15:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

扩增的ITS序列，引物也在一直用着，一直是55度，一锅做的，其余4个顶好，就这一个了
操作一定要细心，否则就是样品没有问题，是正常的
幽兰君 (2014-9-01 16:02:32)

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原帖由 leifengta 于 2014-9-1 16:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

从DNA胶图看出，模板是没有问题。五个孔用的引物都一样吗？能否把扩增胶图附上，以方便进一步分析？

当时没有保存图片，传不了了呢；
幽兰君 (2014-9-01 16:02:48)

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原帖由 zwsyrt 于 2014-9-1 16:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

操作一定要细心，否则就是样品没有问题，是正常的

沸水浴10分钟再扩增；稀释100倍；原模板，都扩增了，还时没有条带，对照有呢
seagate (2014-9-01 16:03:10)

ITS, 我也在做，遇到过类似的问题。但是你没有附上PCR体系，程序和扩增产物电泳图，所以分析毫无根据，只能靠经验。建议：DNA模板500倍稀释，不要担心稀释太大，以你的DNA亮度，1000倍稀释也可以用。通过稀释排除杂质干扰和模板过多问题。必要时可以考虑降落PCR(我这挺好用的).看不到你扩增电泳图，也不知道你的体系和程序，及引物和DNA 来源，没法给出更够具体的建议！