【求助】DGGE聚丙烯胺胶变性梯度胶问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-10-07 10:13 作者: vera+ 来源: 分析测试百科网

最近刚接触DGGE,做了8%的聚丙烯胺胶，梯度为26-52%，Dcode的突变系统，l×TAE，电压和电流都很正常（200V和27mA），16cm的胶。但是在电泳时上样缓冲液一直在加样孔的上边，下不去，还请大神们指点一下，非常感谢！

mingming0638 (2014-10-07 10:14:01)

没加loading buffer吗？按照loading和样品1:5的比例混匀再点样，就下去了。
vera+ (2014-10-07 10:14:22)

QUOTE:
原帖由 mingming0638 于 2014-10-7 10:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

没加loading buffer吗？按照loading和样品1:5的比例混匀再点样，就下去了。
谢谢！跑了还是下不去，空白的loading buffer都下不去，胶和电压都正常，是在找不到啥原因。
mingming0638 (2014-10-07 10:14:52)

QUOTE:
原帖由 vera+ 于 2014-10-7 10:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

谢谢！跑了还是下不去，空白的loading buffer都下不去，胶和电压都正常，是在找不到啥原因。

我感觉你可以试一下这个方法，把胶灌得厚一点，点样的时候把loading的比例稍微提高一点，比如多加1~2微升，然后点样的时候用小枪头，直接伸到孔底部，但不要碰到胶，枪只打到第一档就提出来试试
luoliqiong (2014-10-07 10:15:15)

卤煮怎么破？
我刚开始做，也是这回事，就是跑不下去！
条件：
1XTAE , 10%Gel 梯度是，35-55,55-70都试过，电压80,13h，200V，5h。
样一直在点样孔下，最多跑在浓缩胶里，没有往变性胶跑。
困扰ing

请卤煮帮忙解答！
vera+ (2014-10-07 10:15:28)

我的原因是胶配错，你可以确认下有没有问题。电压我用的是200V 5h的。