【求助】 根据ncbi上的mRNA的序列设计的引物

最新回复

• 49888 (2014-10-07 10:19:21)

  QUOTE:

  原帖由 笑弯了腰 于 2014-10-7 10:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  求助！！！！我根据ncbi上的mRNA的序列设计的引物，用在RNA逆转录成cDNA上扩增。那我直接提取的DNA扩增可以用这个引物吗？

  可以的~~~

• birdfish (2014-10-07 10:19:41)

  QUOTE:

  原帖由 笑弯了腰 于 2014-10-7 10:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  求助！！！！我根据ncbi上的mRNA的序列设计的引物，用在RNA逆转录成cDNA上扩增。那我直接提取的DNA扩增可以用这个引物吗？

  直接提取的DNA我觉得要考虑下是否有内含子吧！

• 笑弯了腰 (2014-10-07 10:20:07)

  3楼，考虑内含子，那是不是指引物里是否含内含子啊，还是提取的DNA？不知道哪位亲身实践过啊

• youreyes (2014-10-07 10:20:25)

  要是你的目的基因没有内含子可以，如果有内含子的话你只要算好了整个基因组的长度延长退火温度就可以了，但是普通的PCR扩增3KB的产物还可以但是越往大片段扩增时就不准确了
  

• qhyu (2014-10-07 10:20:43)

  
  我也遇到这个问题了，一开始用扩增cDNA的引物扩增基因组DNA仅出现一条目的条带，但之后又做了几次总是出现好多杂带，根据测得序列比对后，扩增的目的基因没有内含子，引物、条件都是一样的，但不知道为什么会出现这问题，不知道楼主有没有出现过这种情况