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【求助】我的细胞复苏不活，怎么回事？
【求助】我的细胞复苏不活，怎么回事？
我做的杂交瘤细胞，在液氮里冻存，复苏好几次了，却都不行。刚复苏的细胞，看着都很正常。慢慢就不行了，细胞好像都裂解成碎片了。24小时后，活的细胞就不多了。大家帮忙看看可能是什么原因。我在冻之前，一直用的HAT培养基，还没有驯化为 1640/10 。 不知道这个影响不影响。
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-10-11 11:12 作者: 爱老虎游tt 来源: 分析测试百科网
最新回复
爱老虎游tt (2014-10-11 11:12:44)
补充一下 ： 我的冻存液的配方是 1640：血清：DMSO 的 比例是 5：4：1. 这边好几个实验室也是用这个比例，都没有问题。
uaubc (2014-10-11 11:13:03)
什么冻存条件？？
爱老虎游tt (2014-10-11 11:13:22)
QUOTE:
离心 1000rpm , 10min 。然后 -20度 2 小时 ，-80度 过夜，再放入液氮中。youreyes (2014-10-11 11:13:45)
关于冻存液我们实验室是这样的，胎牛血清：DMSO 9：1，不用加什么培养基，你想啊培养基在冻存的条件下不会起到什么作用的。然后 你复苏的时候要用你冻存前培养细胞时候使用的培养基，基本就是这样。冻存时可以直接把冻存管用棉花包上几层，用皮筋扎上，再放入泡沫盒里，直接放入-70就能够慢慢降温了，隔夜放入液氮中。祝您成功！
爱老虎游tt (2014-10-11 11:14:07)
冻存条件我又试了几次，还是不行。现在就剩下2种可能了：1 冻存液的配方不行，网上好多都是 7：2：1； 2 DMSO有问题。 这两天准备再试下这两个条件。 我复苏用的培养基和冻存之前的培养基是一样的。 细胞刚复苏的时候很正常，就是没有轻微贴壁，都浮在培养基中，然后慢慢死掉。24小时后，都死得差不多了。
youreyes (2014-10-11 11:14:30)
ha111 (2014-10-11 11:14:51)
你复苏的时候是37°快速解冻吗？？ 要快！！
uaubc (2014-10-11 11:15:13)
建议用全血清-------FBS（90%）+DMSO（10%） 冻存 试试
131415 (2014-10-11 11:15:35)
爱老虎游tt (2014-10-11 11:15:56)
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这个我试了，我把血清调到 20%，还是不行。不过差不多已经找出原因了，冻存的时候，离心的时间太长了，我都是离心10分钟。我试了一下离心5分钟，复苏后还可以。
爱老虎游tt (2014-10-11 11:16:20)
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复苏的温度没问题，速度也够快。原因差不多找出来了，我冻存的时候离心时间太长了，离心了10分钟。后来我离心5分钟，复苏后还可以。
爱老虎游tt (2014-10-11 11:16:43)
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这个主意不错。我之前的杂交瘤细胞全都那样冻存了，没有保留。现在虽然找到原因了，但是 还要想办法把以前冻存的杂交瘤细胞复苏活，不然没法交代。 对于你说的向小鼠腹腔注射细胞，要不要先注射石蜡 ？整个过程，要蛮长时间吧 ？还有就是 如果 取实体瘤，来分离，会怎么样？ 能不能把你们的方法的具体步骤告诉我一下？ 谢谢！
ALALA (2014-10-11 11:16:59)
一般离心1000rpm 3min足矣，另外就是细胞冻存注意慢冻速溶原则。。。
misswu61 (2014-10-11 11:17:32)
细胞承受的力是100~200g
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