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【求助】用纯化后的DNA上样电泳做，验证需要加什么试剂？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-10-27 15:45    作者: njkph    来源: 分析测试百科网

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【求助】用纯化后的DNA上样电泳做，验证需要加什么试剂？
我是pcr初学者，用试剂盒提出来的跑PCR，纯化得到DNA，想检测一下跑出来的是不是目标物，老师说直接跑电泳观察，我想知道，是直接把DNA点样到上样孔里跑就行了吗？还需要把DNA和什么试剂混合吗，比如染料，loading buffer什么的，需要加的话，量怎么定？
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  • junhun (2014-10-27 15:46:00)

    加loading buffer然后上样电泳，可以根据条带深浅与marker比较来判断浓度

  • njkph (2014-10-27 15:47:09)

    QUOTE:

    原帖由 junhun 于 2014-10-27 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    加loading buffer然后上样电泳，可以根据条带深浅与marker比较来判断浓度
    我跑胶是用TAE加琼脂制胶，胶里面没有染料，我只加Loading buffer就可以在紫外下显色吗？Loading buffer里面有染料？

  • wiwi (2014-10-27 15:49:44)


    如果你的胶里面没有加入eb 跑胶之后需要在eb里面染色。。。好想要染好久 具体时间你查查吧

  • 04906 (2014-10-27 15:50:05)


    胶里面要加gold view,DNA要加Load buffer，量没什么限制，不过一般都是6x，最好加上Marker

  • rxcc33 (2014-10-27 15:50:25)


    于loding buffer 混合后点样。跑完丢到EB里面染色

  • 66+77 (2014-10-27 15:50:40)


    要加Load buffer缓冲液的，假如你的Load buffer是6*，那你的DNA和Load buffer的混合比例就是5:1, 若是10*的DNA和Load buffer的混合比例9:1，希望能对你有所帮助！

  • IAM007 (2014-10-27 15:51:03)

    琼脂糖凝胶浓度一般最大不超过1%，话说我当年做的时候看TaKaRa的说明书上写着3%就傻乎乎的做成3%凝胶，结果加热很久没有溶解。在凝胶降温到大概60度的时候加入1ul的GoldView ，记得我本科的时候就不用EB了。然后是加Loading Buffer 确认倍数 有6*，2*，楼上已经解释清楚了。和Loading Buffer混合好以后就上样跑胶啦。一般是电泳完才切割胶回收片段
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