【求助】Realtime PCR 扩增曲线峰值和斜率对于相对...

最新回复

• nn255 (2014-10-27 17:55:22)

  
  你用taqman 还是sybr ，如果是taqman，应该是样本中内参多。如果是用taqman，做fam荧光会比其他荧光强很多，尤其是做双重。

• 水母 (2014-10-27 17:55:41)

  QUOTE:

  原帖由 nn255 于 2014-10-27 17:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  你用taqman 还是sybr ，如果是taqman，应该是样本中内参多。如果是用taqman，做fam荧光会比其他荧光强很多，尤其是做双重。

  内参和目的基因都是用的SYBR，为什么内参峰值高低差别也很大？

• zhy平平 (2014-10-27 17:56:01)

  其实峰值这研究意义不大，CT才反应出你的初始模板量，如果你内参模板加入的量是一样的话，你的内参管的反应肯定不稳定，ct偏差有点大。实验操作需要注意。

• wu11998866 (2014-10-27 17:56:17)

  感觉不像一个基因呀。

• 水母 (2014-10-27 17:56:42)

  QUOTE:

  原帖由 zhy平平 于 2014-10-27 17:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  其实峰值这研究意义不大，CT才反应出你的初始模板量，如果你内参模板加入的量是一样的话，你的内参管的反应肯定不稳定，ct偏差有点大。实验操作需要注意。 ...

  
  内参模板都是1uL/管，但是不同样本的RNA浓度差异，有的3000+ng/uL，有的1000+ng/uL，逆转录的时候也都是按照1uL取的RNA，会不会造成了不同样本间cDNA浓度差异也大？不过操作过程也是容易导致误差的重要环节，哎。。。
  

• 水母 (2014-10-27 17:57:04)

  QUOTE:

  原帖由 wu11998866 于 2014-10-27 17:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  感觉不像一个基因呀。

  内参是一个（左边6条，峰值高的），目的基因是一个（右边6条，峰值低的）你指的不像一个基因是什么意思呢？

• bgf5 (2014-10-27 17:57:23)

  
  定量关键看阈值以下那段，具体最后峰高多少没有太大的意义，图中内参峰低的CT值和峰高的CT值有明显差别吗？还有与之相对应的目的片段的CT值如何？是不是有相同的变化趋势？