查看完整版本请点击这里：
【求助】用Primer5设计引物时，关于△G
用Primer5设计引物时，△G是什么意思？遇到引物二聚体，交叉二聚体、发卡结构，错配等方面，△G有选择的范围吗？大概在什么范围内比较好？而且一般，△G的数值前面都有个“—”号，是放出能量的意思吗？选择时候只考虑绝对值吗？各位大神，本人菜鸟一枚，求指导啊~~~不胜感激啊~~~【求助】用Primer5设计引物时，关于△G
查看完整版本请点击这里：
【求助】用Primer5设计引物时，关于△G
【求助】用Primer5设计引物时，关于△G
最新回复
any333 (2014-10-27 17:58:35)
好像我记得是退火的能量吧 还是变性的能量 总之我觉得不要太纠结了 尽管引物设计原则上有一点要求。我设计引物是就看看有没有发卡结构 3端有没有错配 上下引物tm值 就可以了。更有牛人直接用笔在序列上圈一下就直接用 连软件都不要的。
misswu61 (2014-10-27 17:58:56)
我也是看一些东西得到的信息，希望能帮到你！
ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端ΔG值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间ΔG值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。
引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行—这里面应该是指的引物二聚体的ΔG不能超过4.5不然容易导致引物二聚体，但是我之前设计引物有的是6.5左右的发现只要不超过8一般单重还是能出的，但是如果是多重的都说不要超过6！还有楼上说的很对就是引物3端不能出现配对，这个时候即使只是GC两个碱基配对那么能值也是很高的，而且容易出现错配，具体的信息你可以在查一下！希望能帮到你！
xuuuu (2014-10-27 17:59:09)
一般下面的几个选项,引物二聚体，交叉二聚体、发卡结构，错配等方面,只要配对的碱基对不是太多都可以.3-5个可以接受的
panda王 (2014-10-27 17:59:36)
ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部 ...
======================================
您好，您所说的单重和多重是什么意思呢，还望指点
misswu61 (2014-10-27 18:00:02)
QUOTE:
不好意思啊，中间一段时间有事情一直没有上，单重PCR就是简单的一对引物进行的PCR，多重PCR就是一种节省资源的PCR方法，就是在一个反应里有很多对引物进行扩增，产物是多条带的。查查百度应该有！希望能帮助你！【求助】用Primer5设计引物时，关于△G