【求助】培养MRC-5细胞的问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-12-05 16:21 作者: chuntian1983 来源: 分析测试百科网

MEM使用的是日水无酚红MEM，胎牛血清，3%的谷氨酰胺，5.6%碳酸氢钠。配置比例MEM+20%胎牛血清+1%谷氨酰胺+2%碳酸氢钠，配置完后生长液渗透压是274，PH7.57，传代后到第三天后生长速度就慢下来了。传代用的是康宁的T25方瓶，细胞代次是36代。求大侠解读

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【求助】培养MRC-5细胞的问题

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wiwi (2014-12-05 16:22:04)

我用的谷氨酰胺是4mM的，3%的谷氨酰胺是否量太多啦，谷氨酰胺过量的话对细胞有毒性的。另外培养基的pH应该在7.2-7.4之间最好。
chuntian1983 (2014-12-05 16:22:23)

QUOTE:
原帖由 wiwi 于 2014-12-5 16:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
我用的谷氨酰胺是4mM的，3%的谷氨酰胺是否量太多啦，谷氨酰胺过量的话对细胞有毒性的。另外培养基的pH应该在7.2-7.4之间最好。
这期间我试过NAHCO3加入1.5%PH大概是7.2~7.4的，但细胞还是这个样子
wiwi (2014-12-05 16:22:53)

我最近养细胞也出现点问题，如果能够排除试剂问题的话就看一下是否是支原体污染之类的。相互交流经验吧。
dragonkilly (2014-12-05 16:23:19)

培养基配比应该还可以，PH应该讲一点儿，到7。4吧。其它的方面也很多因素，消化液、传代手法培养基配制过程等等
ending (2014-12-05 16:23:44)

什么是日水无酚红培养基？按ATCC的说法，胎牛血清10%就行了。标准的培养基，pH值一般已经在适当范围之内了，没有必要再加碳酸氢钠去把培养调得偏碱。我记得正常的渗透压在290-330，你的这个是不是偏低了？是配液时没有完全溶解？
any333 (2014-12-05 16:24:15)

我的EPC细胞最近也是这种情i况，基本上不分化，但是贴壁还不错，新配置的MEM，pH7.3-7.4，现在最可能就是染支原体了，你这种情况也是做个支原体检测
bgf5 (2014-12-05 16:24:38)

碳酸氢钠加到1,5g-2.3g，百分之十血清，PH7.3，谷氨酰胺百分之一
831226 (2014-12-05 16:25:10)

两个方案
1.试试高糖DMEM
2.有可能是细胞密度太大了传代后速度就会变快，或者隔一天换一次培养基试试。
chuntian1983 (2014-12-05 16:25:43)

细胞数量本来就不多，消化后计数仪技术结果活细胞数不到70%，正准备换另一种MEM