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【求助】请问一下细胞油红O染色的具体步骤
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发表于: 2014-12-06 11:21 作者: ilovegaga 来源: 分析测试百科网
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【求助】请问一下细胞油红O染色的具体步骤
请教大家细胞油红O染色的具体步骤,谢谢了
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【求助】请问一下细胞油红O染色的具体步骤
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shenkunjie
(2014-12-06 11:21:46)
1.染色液的配制
材料:油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉,溶于少量异丙醇中,然后加异丙醇至100ml,棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存,为储存液,可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀,定性滤纸过滤,稀释后数小时内用完。
2.10%中性甲醛的配制
材料:中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶
称取1g中性甲醛粉末,加入10ml的三蒸水中,密封,在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效,最好4度保存。
3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品,hoechst33342染核的话,塑料板自发荧光也为蓝色,必须考虑。
5.染色步骤:
5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
5.2 用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。
5.3 加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可)。固定的是细胞膜。
5.4 稀释油红储存液,油红:去离子水=3:2,滤纸过滤,室温放置10min(除去一些杂质,染色结果更清晰)。
5.5 染色10min左右,加的体积覆盖住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。
5.6 脱色,用75%酒精/60%异丙醇漂洗,除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题,背景并不会残留多少)。
5.7 复染,淡苏木染色1/5分钟,pbs漂洗(这一步不做也可,看试验需要,并且苏木素会把胞浆染红,如要显示核, hoechst33342也可以,浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。
5.8甘油明胶封片(封片后可长期保存)。
5.9 显微镜观察。
注意事项:
脂肪油红染色,有的是动物/人体脂肪组织切片,或细胞爬片。各有操作差异。以下是各论坛方法小结,不全。
1.完全成熟饱满的脂肪细胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以压片,切片都要考虑到这个问题。
2.细胞爬片细胞溶液脱落,特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。
3.如果做脂肪组织冰冻切片,冰冻温度比普通要低,切片厚度加厚。
分子式
(2014-12-06 11:22:06)
我也用了该方法,可是都没有染上颜色,不知是为什么?希望各位大侠不吝赐教!
nn255
(2014-12-06 11:22:21)
有人细胞染色加过穿孔剂的不??
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【求助】请问一下细胞油红O染色的具体步骤
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shenkunjie (2014-12-06 11:21:46)
材料:油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉,溶于少量异丙醇中,然后加异丙醇至100ml,棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4℃保存,为储存液,可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀,定性滤纸过滤,稀释后数小时内用完。
2.10%中性甲醛的配制
材料:中性甲醛(多聚甲醛) 密封瓶
称取1g中性甲醛粉末,加入10ml的三蒸水中,密封,在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效,最好4度保存。
3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品,hoechst33342染核的话,塑料板自发荧光也为蓝色,必须考虑。
5.染色步骤:
5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
5.2 用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。
5.3 加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可)。固定的是细胞膜。
5.4 稀释油红储存液,油红:去离子水=3:2,滤纸过滤,室温放置10min(除去一些杂质,染色结果更清晰)。
5.5 染色10min左右,加的体积覆盖住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。
5.6 脱色,用75%酒精/60%异丙醇漂洗,除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题,背景并不会残留多少)。
5.7 复染,淡苏木染色1/5分钟,pbs漂洗(这一步不做也可,看试验需要,并且苏木素会把胞浆染红,如要显示核, hoechst33342也可以,浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。
5.8甘油明胶封片(封片后可长期保存)。
5.9 显微镜观察。
注意事项:
脂肪油红染色,有的是动物/人体脂肪组织切片,或细胞爬片。各有操作差异。以下是各论坛方法小结,不全。
1.完全成熟饱满的脂肪细胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以压片,切片都要考虑到这个问题。
2.细胞爬片细胞溶液脱落,特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。
3.如果做脂肪组织冰冻切片,冰冻温度比普通要低,切片厚度加厚。
分子式 (2014-12-06 11:22:06)
我也用了该方法,可是都没有染上颜色,不知是为什么?希望各位大侠不吝赐教!
nn255 (2014-12-06 11:22:21)
有人细胞染色加过穿孔剂的不??
【求助】请问一下细胞油红O染色的具体步骤