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【求助】Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
本人用镍柱分离带有6个组氨酸标签的重组蛋白,缓冲液是20mM磷酸三钠、500mM氯化钠、10mM咪唑,洗脱缓冲液是250mM咪唑。经过几次层析后发现:我的目的蛋白都穿透了,没有挂住。。。请问大家,这是怎么回事呢?该咋办呢?谢谢!【求助】Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
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【求助】Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-1-17 17:06 作者: +小生怕怕+ 来源: 分析测试百科网
最新回复
zhenxin (2015-1-17 17:07:12)
1,如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的,这是正常的,250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2,在10mM的情况下,蛋白就下来了,如果你的测序是正确的,那可能是蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外,与Ni结合不紧密。
+小生怕怕+ (2015-1-17 17:07:31)
zhenxin (2015-1-17 17:07:54)
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可能与Ni柱的载样量有关系,只能挂住一定量的蛋白,剩下的都透过去了。你们实验室还有人用Ni柱吗?问问他们载样量多大吧。
+小生怕怕+ (2015-1-17 17:08:28)
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我用的是Chelating Sepharose Fast Flow,不知道这个填料怎么样啊?吸附效果是不是不是很好呢?DNA (2015-1-17 17:08:44)
dmg (2015-1-17 17:09:02)
+小生怕怕+ (2015-1-17 17:09:22)
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呵呵……GE的~~您用过么?+小生怕怕+ (2015-1-17 17:09:41)
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呵呵……GE的。不知道怎么样呢?+小生怕怕+ (2015-1-17 17:10:34)
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呵呵,没用过这家的,大公司的说明书比较可信,你看看说明书上对吸附量的描述吧,它写多少,就是多少。kulee (2015-1-17 17:11:38)
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呵呵,用这么好的填料,你们实验室挺强的吧?怎么没人懂蛋白纯化呀?kulee (2015-1-17 17:12:29)
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懂蛋白纯化的人很多,大家做的不是一个蛋白,而蛋白纯化又那么有个性,也有可能是我蛋白的事~~bluelake (2015-1-17 17:13:06)
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