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【求助】细胞转染后细胞总是死是怎么回事?
【求助】细胞转染后细胞总是死是怎么回事?
我最近在做细胞转染,用的是鱼的细胞系,贴壁生长,用MEM培养基加10%的FBS培养,转染实验时,将细胞接入6孔板里,待贴壁后,将培养基吸出,用opti-MEM无血清培养基洗两次,然后每孔加2mlopti-MEM无血清培养基,加预先混好的Lipo2000与质粒的混合稀释液,每孔加0.5ml,待4h后,换成正常培养液,然而在4h换液时,细胞已经有大量的死亡,换液后细胞也没有变好,不知道是什么原因,请各位大侠帮忙分析一下吧~~
还有,转染试剂是应该用无血清培养基稀释吧?用正常培养基稀释会不会有什么问题呢?
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最新回复
ha111 (2015-1-29 14:32:43)
你的质粒有去内毒素吗?还有那个“预先混好的Lipo2000与质粒的混合稀释液”比例是怎样的?Lipo2000对细胞也是有毒性的,还有转染时细胞的密度是多少?
summerxx (2015-1-29 14:33:03)
QUOTE:
质粒是用无内毒素的试剂盒提取的,分别用250微升opti-MEM稀释质粒4微克、Lipo2000 10微升,然后混合均匀,20分钟后加入到孔里。细胞密度大约是10*6吧,请问我哪里出问题了呀?非常感谢!ha111 (2015-1-29 14:33:20)
zbboom (2015-1-29 14:33:40)
支持楼上的说法,Lipo2000对细胞伤害还是很大的。鱼的细胞系没有做过,具体什么比例没有摸索过。你可以适当的摸索一下Lipo2000与质粒的转染比例,寻找最佳的转染条件。可以试试polo。
jude (2015-1-29 14:34:04)
summerxx (2015-1-29 14:34:24)
QUOTE:
那请问你们现在都用什么牌子的转染试剂呢?谢谢~jude (2015-1-29 14:34:44)
fei1226com (2015-1-29 14:35:11)
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