【求助】 腹水直接冻存细胞复苏

最新回复

• misswu61 (2015-1-29 15:10:59)

  你是想从腹水中提取杂交瘤细胞吗？没有这样做过

• minran_1980 (2015-1-29 15:11:26)

  
  我觉得是可以得到杂交瘤的但是直接腹水沉淀冻存，大部分都是血细胞之类的杂细胞吧，这样直接冻存没有什么意义呀
  如果你想要产生相应腹水的杂交瘤细胞，可以先无菌抽取小鼠腹水（肚子很大的，抽1毫升也许就可以了，加培养基冲淡离心），1000转离心，沉淀可用培养基重新悬浮再清洗离心一次或者两次，然后加足量培养基放入一次性培养瓶中培养，隔天换液，如果杂交瘤细胞贴壁，直接去掉上清（血细胞一般不贴），如果杂交瘤细胞不贴则离心换液，尽量减少杂细胞，培养几天多次换液之后，杂交瘤细胞生长较好就可以达到一定数量冻存了

• fsdd817 (2015-1-29 15:11:47)

  QUOTE:

  原帖由 misswu61 于 2015-1-29 15:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你是想从腹水中提取杂交瘤细胞吗？没有这样做过

  对呀，直接用腹水的沉淀培养杂交瘤细胞，之前有成功过，最近总是杂质很多，想要的细胞很少

• fsdd817 (2015-1-29 15:12:06)

  QUOTE:

  原帖由 minran_1980 于 2015-1-29 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我觉得是可以得到杂交瘤的但是直接腹水沉淀冻存，大部分都是血细胞之类的杂细胞吧，这样直接冻存没有什么意义呀
  如果你想要产生相应腹水的杂交瘤细胞，可以先无菌抽取小鼠腹水（肚子很大的，抽1毫升也许就可以了，加培养基冲淡 ...

  恩恩，就是感觉有血细胞类的杂细胞很多，还想问一下，这样不用HAT培养基筛选吗
  

• minran_1980 (2015-1-29 15:12:33)

  QUOTE:

  原帖由 fsdd817 于 2015-1-29 15:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  恩恩，就是感觉有血细胞类的杂细胞很多，还想问一下，这样不用HAT培养基筛选吗
  

  不需要，就是先将杂交瘤和血细胞都培养着，然后换液，反复如此基本上可以清除掉，因为血细胞在RPMI1640里也不会分裂

• fsdd817 (2015-1-29 15:12:57)

  非常感谢，正想着用这批腹水试试。那要是这个样子得多久才能分离出来呢？您有尝试过嘛？

• 04906 (2015-1-29 15:13:19)

  QUOTE:

  原帖由 fsdd817 于 2015-1-29 15:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  非常感谢，正想着用这批腹水试试。那要是这个样子得多久才能分离出来呢？您有尝试过嘛？

  我们试过，基本都可以做到，无论是品质差的腹水还是品质好的都可以，时间肯定不一样
  品质差的腹水，颜色淡，抗体少，血细胞少，表明小鼠腹腔内杂交瘤细胞生长较少可能被消灭掉或者抑制住，这种类型的腹水如果要取细胞，必须全取离心培养，才会获得少量细胞，培养到冻存的时间长
  品质好的腹水，颜色深，抗体多，血细胞多，表明小鼠腹腔内杂交瘤细胞状态比较好，这种类型要获取杂交瘤细胞，只需要取少量，否则血细胞过多影响杂交瘤的贴壁和分裂

• fsdd817 (2015-1-29 15:13:39)

  QUOTE:

  原帖由 04906 于 2015-1-29 15:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我们试过，基本都可以做到，无论是品质差的腹水还是品质好的都可以，时间肯定不一样
  品质差的腹水，颜色淡，抗体少，血细胞少，表明小鼠腹腔内杂交瘤细胞生长较少可能被消灭掉或者抑制住，这种类型的腹水如果要取细胞，必须全取离心培 ...

  那颜色浅的腹水是有点黄色的，颜色深的是血性腹水吗，红色的吗？