【求助】液体培养后丝状真菌的扫描电镜

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-2-02 16:52 作者: hcy517 来源: 分析测试百科网

我想做一下液体培养后丝状真菌的扫描电镜。
实验室的人都是做细菌的，他们是把菌液滴在盖玻片上，等菌液干后加戊二醛固定，然后漂洗，梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法，就是加试剂处理后离心，可是菌丝根本离不下来，14000转都不行，想问一下各位高手：

查看完整版本请点击这里：
【求助】液体培养后丝状真菌的扫描电镜

我也来说两句查看全部回复

最新回复

小女人@ (2015-2-02 16:52:54)

真菌需要用乳酸棉兰染色，显微照相才能看的清楚。不知道你的真菌是在固体培养基上培养的，还是震荡培养的？
p1900 (2015-2-02 16:53:26)

我是要做电镜，振荡培养
886爱 (2015-2-02 16:54:13)

怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来？
yuanyuan (2015-2-02 16:54:43)

干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗？
PP熊 (2015-2-02 16:55:15)

其实菌丝不像细菌那么小，一般在光学显微镜下，染色就能看清形态，而且操作简单，菌丝也不会变形。
你用的是电镜扫描处理样本的通常方法，要是必须用电镜的话，你可以试试更换脱水梯度和时间，脱水过程温和一些，变形情况会好转。
PP熊 (2015-2-02 16:55:48)

谢谢，是必须要用电镜，因为要观察细胞壁
今生如此 (2015-2-02 16:56:21)

可以使用固体培养基培养，盖玻片插片法制片子.
hcy517 (2015-2-02 16:56:59)

麻烦再问一下，我同时也做了固体平板上的电镜制片。按文献讲的：从菌落上切琼脂块薄片，然后固定脱水等等。我做完干燥之后，发现薄片不再是平的，变卷曲了，想问下还能用吗？扫描电镜的样品是否必须是平的？
以前没做过，可能问得有点弱，请高手帮忙
jishiben (2015-2-02 16:57:28)

对于菌丝会浮起来的问题，很难解决。但是你说变形的话，倒不像你说的那样，戊二醛既然是固定剂，就是为了保持菌体的形态不发生大的变化。我做过细菌的固定，戊二醛和锇酸是固定剂，而后面用乙醇梯度脱水后再用乙酸异戊酯置换，形态会好些。