维生素B2(核黄素)的测定——荧光法(一)

关键词:食品安全检测 农药标准物质 无机标准样品 进口标准物质
1.原理
核黄素在440~500 nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。利用硅镁吸附剂对核黄素的吸附作用除去样品中的干扰荧光测定的杂质,然后洗脱核黄素,测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2 S2O4),将核黄素还原为无荧光物质,再测定试液中残余杂质的荧光强度,两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。
2.仪器
①高压消毒锅。
②电热恒温培养箱。
③核黄素吸附柱。
④荧光分光光度计。
3.试剂
①硅镁吸附剂:60~80目。
②2.5mol·L -1无水乙酸钠溶液。
③10%木瓜蛋白酶:用2.5mol·L -1乙酸钠溶液配制,用时现配。
④10%淀粉酶:用2.5mol·L -1乙酸钠溶液配制,用时现配。
⑤O.1mol·L -1盐酸。
⑥1mol·L -1氢氧化钠。
⑦O.1mol·L -1氢氧化钠。
⑧20%低亚硫酸钠溶液:此液用时现配。保存在冰水浴中,4 h内有效。
⑨洗脱液:丙酮:冰乙酸:水(5:2:9)。
⑩0.04%溴甲酚绿指示剂:取0.1g溴甲酚绿置于小研钵中,加入1.4mol·L-1氢氧化钠研磨片刻,再加入少许水继续研磨至完全溶解,用水稀成250 mL。