【求助】 G418细胞筛选

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-2-23 22:35 作者: mooon 来源: 分析测试百科网

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刚开始做细胞，遇到一个奇怪的现象，就是我做G418药筛的时候，给药的第二天就会出现细胞全部死亡，而且是300、600、700、1000ug/ml这样间断的几组（两个复孔都是），前后做了两次都是这样，实在是想不通，希望各位指点迷津

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kulee (2015-2-23 22:36:30)

可能的最低浓度就高？
kulee (2015-2-23 22:36:52)

也有可能就是你的细胞被污染了
yes4 (2015-2-23 22:38:19)

我是做水稻转化的，对于G418抗性的开始是有点像被筛死的现象，但是到后期会长新愈伤。希望能给你一丢丢的帮组
wzqzy (2015-2-23 22:38:40)

初始浓度太高了吧？
baidukk (2015-2-23 22:38:57)

楼主你的开始浓度300ug/ml，是我平常用的浓度的300倍以上，我们实验室G418开始浓度是200ng/ml。最高是1000ng/ml，也就是1ug/ml，300ug/ml的浓度实在太大了，数量级错了1000倍，活活靶细胞毒死了，另外还需要补充的是，做G418筛选一般在转染后24h开始，如果要加快筛选，可以将贴壁细胞悬浮后，直接加药500ng/ml，而且G418筛选的细胞很容易产生抗性，所以应该用逐渐递增的浓度进行筛选，比如500、750、1000ng/ml，细胞密度保持在25%，如果50%可以试试我说的悬浮后加药，一般假药后第二天就大量死亡，在此间，保持培养基足够细胞生存3天，如果不能可以换液后在加入相同浓度的G418。
cbou876 (2015-2-23 22:39:32)

我用的是100mg/ml，不过是提供一个外在压力的。希望对你有帮助！
qqshepherd (2015-2-23 22:41:00)

100.200还好300就几乎全死了，不过还有个别比较顽强~~

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