【求助】关于涂板克隆的问题

最新回复

• sunbent (2015-2-23 23:38:35)

  管它多少个~~~~~~~~！！！

• sunbent (2015-2-23 23:38:54)

  能验证出阳性克隆就是王道！

• hold住 (2015-2-23 23:41:12)

  QUOTE:

  原帖由 sunbent 于 2015-2-23 23:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  能验证出阳性克隆就是王道！

  关键问题是验证不出来的哇~重做了一遍之后就好些了，主要是想针对这样的现象，和大家交流交流，分析一下原因~谢谢你的参与！

• ha111 (2015-2-23 23:41:38)

  
  转化效率低

• hold住 (2015-2-23 23:42:03)

  QUOTE:

  原帖由 ha111 于 2015-2-23 23:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  转化效率低

  谢谢你的解答~转化效率低指的是连接后的载体进入到感受态细胞中的量少么？有哪些可能的原因呢（感受态细胞效率不行？）其次转化效率低的直接体现就是克隆形成数少么？  最后，除了转化效率低之外，还有哪些可能的原因呢？

• prettygirl@ (2015-2-23 23:42:23)

  培养的时间是否有些短了，我们这里都是37℃培养16-24h呢，还有涂板时玻璃棒灼烧后要多凉一会，可能太热了会烫死一部分感受态细胞吧，最后到源头的话可能就是感受态的转化效率低吧，要不做个阴性对照，看看能长出多少克隆。。。
  

• hold住 (2015-2-23 23:43:36)

  QUOTE:

  原帖由 prettygirl@ 于 2015-2-23 23:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  培养的时间是否有些短了，我们这里都是37℃培养16-24h呢，还有涂板时玻璃棒灼烧后要多凉一会，可能太热了会烫死一部分感受态细胞吧，最后到源头的话可能就是感受态的转化效率低吧，要不做个阴性对照，看看能长出多少克隆。。。
  ...

  阴性对照就是不加入连接的体系，然后其他的步骤一样？

• prettygirl@ (2015-2-23 23:44:00)

  QUOTE:

  原帖由 hold住 于 2015-2-23 23:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  阴性对照就是不加入连接的体系，然后其他的步骤一样？

  嗯，把连接产物换成无菌水，其它的步骤都一样

• ending (2015-2-23 23:44:22)

  
  我觉得这与用什么感受态细胞有关，比如DH5a是用于扩增的，用它转化一般菌落长很多，但BL21就相对少了！

• changlhsyo (2015-2-23 23:44:44)

  看阳性率才是关键的，如果都是阳性说明转化效率还是很高的

• gogo (2015-2-23 23:45:03)

  用的哪个公司的T-载体，建议Promega，我试过几个公司，就他家最稳定，绝对有阳性克隆，

• zhezhe (2015-2-23 23:45:22)

  
  正常现象，我做的时候还有只长一个菌落。