【求助】做土壤中，活细菌的数量

最新回复

• 大花猫bb (2015-3-08 11:49:30)

  目前可培养的微生物只是很少的一部分，还有你的方法做的也是只一部分，不可能把所有菌株做全的，这样的话，你所追求的活菌，就没有什么意义了。

• efp (2015-3-08 11:50:04)

  有相应的方法。
  第一，利用相应培养基进行培养，但是能培养的细菌其实在很少，如果进行培养，将有大部分菌株丢失。
  第二，利用活细菌检测试纸，这个你管公司问就可以，在微生物实验里很普遍的。

• 妮子@ (2015-3-08 11:50:33)

  但是最关键的是，你要搞清楚自己要干什么？要哪些结果？为什么要这些结果？根据哪些结果可以得到哪些结论？有些实验考虑会是多余的。

• wwwh (2015-3-08 11:51:07)

  我的意思是，参与土壤活性的微生物，比如细菌，在特定样品和特定时间，它的活性细菌总数（活着的）是一定的。我们常规提取总DNA，然后用通用引物定量PCR，得出的值并不准确。因为提取的总DNA中肯定有一部分是已经死亡的细胞释放出来的未被降解的DNA，这样在一定程度上夸大了荧光定量PCR值。您觉得呢？

• PP熊 (2015-3-08 11:51:36)

  我只是想找出一种方法，将土壤样品中的死亡细胞中的DNA去除，再用常规的DNA提取和定量PCR来确定样品中的细菌总数。这样得出的值，可以算是活细胞数量。

• efp (2015-3-08 11:52:10)

  你的荧光定量是相对定量，还是绝对定量啊？不管是相对定量还是绝对定量，都是拿来比较，说是定量，但也是在一定条件下的相对比较。根据CT值或相对的CT值来进行比较，找规律。实验中有死菌还是没有死菌，都是反应了菌的相对量。但也不能你跟菌这个相对量说，某个菌多多少，只能说相对多多少。并不能根据已有的CT值或相对的CT值计算或得到相应菌量。
      如果你有要定的菌的信息，我建议，你跟菌该菌的信息去做，可能会好些。要是只是根据总DNA做的总体的PCR，我觉得那就没必要取出什么死菌了。这里的误差都会大雨你所谓去除的死菌的数量。

• hcy517 (2015-3-08 11:52:41)

  恩。感谢您的辛苦回复。我刚才查阅了文献，确实有不少介绍用不同方法去除样品中死亡细胞DNA的方法，然后采用定量PCR（绝对）测定特定菌种的数量。我觉得，在某些特定环境体系，细胞更新换代很快，样品中有不可低估的死亡细胞DNA存在，对我们分析数据造成了一定的误差干扰。

• dadaai (2015-3-08 11:53:23)

  您好，对去除样品中死亡细胞DNA的方法我也很感兴趣，我想测食品发酵过程中微生物的动态变化