【求助】细胞融合

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-3-17 19:58 作者: shanzhapia696 来源: 分析测试百科网

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【求助】细胞融合

我是做单抗的，最近细胞融合一直做得不顺利，融合之后克隆长的很少而且长的很慢，各方面原因都找了，包括培养箱的温度和浓度都校验过了，但还是没有效果，我现在在怀疑融合时的技术手法有问题，求高手指点能提高融合率的技术方法，本人不甚感激。

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newway (2015-3-17 19:58:35)

我也做单抗的，之前做单抗融合的不错，后来融合的就低了，我的一些经验：收集sp2/0时要用dmem洗一下，去脾脏细胞时杂质要少，将2种细胞混匀离心后，弃上清时一定要弃干净，2种细胞混匀时要混匀充分。差不多了
shanzhapia696 (2015-3-17 19:58:56)

QUOTE:
原帖由 newway 于 2015-3-17 19:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
我也做单抗的，之前做单抗融合的不错，后来融合的就低了，我的一些经验：收集sp2/0时要用dmem洗一下，去脾脏细胞时杂质要少，将2种细胞混匀离心后，弃上清时一定要弃干净，2种细胞混匀时要混匀充分。差不多了 ...
我们sp2/0都是用1640养的，收集的时候是把上清倒掉，加PBS洗一遍。脾细胞是用无菌注射器吸入PBS然后直接吹脾脏收集的。能留个联系方式吗，想详谈！我现在真是心急如焚啊！
nikun230 (2015-3-17 19:59:17)

具体情况不清楚，不知是融不上还是阳性低，最主要的是SP2/0骨髓瘤细胞状态及小鼠免疫时间，还有一个最重要是促溶剂
shanzhapia696 (2015-3-17 20:00:24)

QUOTE:
原帖由 nikun230 于 2015-3-17 19:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

具体情况不清楚，不知是融不上还是阳性低，最主要的是SP2/0骨髓瘤细胞状态及小鼠免疫时间，还有一个最重要是促溶剂

有时候免疫的小鼠效价蛮高的，但是测不到阳性值
##蒙奇奇 (2015-3-17 20:00:41)

一方面可能是取样时间过久，让细胞过度生长，不要让细胞过度生长，因为非分泌的杂交瘤细胞将成为优势，压倒分泌抗体的杂交瘤细胞，另一方面可能是出现假阳性，我建议你复测一遍吧！
viviwang1987 (2015-3-17 20:01:01)

sp2/0收集时要用无血无抗DMEM洗1~2次，彻底去除培养基中的血清、抗生素和细胞代谢产物。

脾细胞：彻底去除脾脏上的结缔组织（会影响融合率），取脾细胞切忌有杂质，也会影响融合率，并且一定要吹散成单个细胞。

两种细胞混合离心后，残液一定要吸干净，否则会影响下一步的PEG作用浓度。

PEG要提前预热，加PEG时，速度要“慢-快-慢”，终止时也是。
特别强调加入PEG后间隔的1分钟，应将融合管置于37度水中，使PEG发挥最大的效果，才好。

终止后，部分细胞刚刚融合，所以应减少细胞的晃动，37度孵育10分钟后离心。

饲养细胞量一定要足，2*105个/mL。
铺板后，在超净台里放置10~15分钟，等细胞大部分都沉降下来后，再移入培养箱中，这样细胞分布均匀，防止细胞在孔周围分布。
viviwang1987 (2015-3-17 20:01:39)

融合后也要尽量减少细胞板的震动，否则会使细胞克隆分散，不能准确判断克隆数（亚克隆时的注意事项）。融合后八九天左右，肉眼即可看到克隆，这时在显微镜下记录各孔的克隆数（这是亚克隆时必须的），之后将细胞克隆吹散，有组于细胞的生长，12~15天即可检测。
viviwang1987 (2015-3-17 20:02:36)

融合后应尽快检测，每天都要观察，阳性克隆长满后应尽快扩大培养和亚克隆，以防其他非分泌Ab的细胞过度生长。