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【求助】求助PCR电泳分析,

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-5-11 15:02    作者: 青青草    来源: 分析测试百科网

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【求助】求助PCR电泳分析,
做了内参cyclophilin，出现了匪夷所思的结果，电泳图见附件。
图中，第一个为RNA电泳图；第二个为RNA为模板的电泳图，第三个是以经DNase处理后得到的cDNA文库为模板的PCR电泳图；第四个为未做DNase处理得到的cDNA文库为模板的PCR电泳图。图4中部分样品出现的非特异性条带很让人不解，以前从未出现过这种情况
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【求助】求助PCR电泳分析,


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最新回复

  • 妮子@ (2015-5-11 15:03:23)

    没看明白呀，是对图四疑问？用DNase和没用有区别，说明你的RNA还是混有DNA污染。

  • 今生如此 (2015-5-11 15:04:42)

    一般为

    48h

    以内，

    有些最好于当日电泳检测，

    大于

    48h

    后带型不规则甚至消

  • PP熊 (2015-5-11 15:05:53)

    细菌16SrDNAV3区带GC夹子PCR94 50S55 30S72 30S25循环条带拖尾，不知道什么原因，怎么优化，求助循环30次的时候 空白条带很明显

  • 兔子 (2015-5-11 15:06:34)

    细菌16SrDNAV3区带GC夹子PCR
    94 50S
    55 30S
    72 30S
    25循环
    条带拖尾，不知道什么原因，怎么优化，求助
    循环30次的时候 空白条带很明显

  • 大花猫bb (2015-5-11 15:07:14)

    体系中加入一些BSA试试，电泳的时候最好是有marker对照

  • 冰激凌 (2015-5-11 15:07:44)

    还有，94℃ 50S有点长，改为30S试试，因为V3区的目的片段大概是200左右吧

  • wwwh (2015-5-11 15:08:21)

    是的，但是考虑有GC夹子所以想延长点变性时间。
    我试试30S

  • n111 (2015-5-11 15:08:58)

    跑PCR产物电泳怎么着也得点个marker吧。。。。
    像楼上的一样建议，加BSA试试看，另外PCR可以用touch down试试看，效果应该比你这个要好

  • yazi (2015-5-11 15:09:29)

    你们实验室一直用的是这个程序吗？我们做细菌的DGGE一般都是用TOUCHDOWN程序或者你可以选择做V6区，V6区引物特异性强于V3区。

  • 大花猫bb (2015-5-11 15:10:03)

    出现拖尾很有可能是你的模板降解了，

  • yuanyuan (2015-5-11 15:10:35)

    我觉得可能是你加的酶量过多，或者退火温度有点低了

  • 女儿情 (2015-5-11 15:11:07)

    我觉得可能是你加的酶量过多，或者退火温度有点低了
    用的是预混试剂盒
    前面用分装的试剂盒 空白一直有条带

  • rrra6 (2015-5-11 15:11:45)

    跑PCR产物电泳怎么着也得点个marker吧。。。。
    像楼上的一样建议，加BSA试试看，另外PCR可以用touch down试试看，效果应该比你这个要好
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