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【求助】求电镜前处理过程
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发表于: 2015-5-11 15:39 作者: 鲇鱼少爷 来源: 分析测试百科网
查看完整版本请点击这里:
【求助】求电镜前处理过程
我最近要做悬浮细胞扫描电镜,可操作人员不知道前处理过程,我只需要做好爬片就行,但问了许多细胞学老师,他们几乎不做这个,现求助知情者,谢谢~
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【求助】求电镜前处理过程
我也来说两句
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箭头儿
(2015-5-11 15:39:59)
我也没有做过,爬片之后直接用盖玻片去做是没问题的,为了防止细胞变形,爬片后的的盖玻片应该做临界点干燥。如果来不及爬片,可以把细胞悬液滴在盖玻片上,空气干燥后去做,这样很快就能观察,但细胞会变形。
鲇鱼少爷
(2015-5-11 15:40:21)
爬好片的片子不是放在3%戊二醛里面4摄氏度保存吗?可不可以拿着浸在戊二醛的玻片去做电镜,处理的地方和做电镜的地方比较远
箭头儿
(2015-5-11 15:40:40)
戊二醛固定后在4摄氏度中保存一年以内都可以做,固定后在室温条件下短时间放置也不影响效果,固定后的盖玻片不要重叠以免细胞脱落。
鲇鱼少爷
(2015-5-11 15:41:00)
还有个问题想请教一下,做细胞凋亡的荧光观察,如何才能做双激发?我用的是双染,但每次只能用一种波长的光激发,没有同一画面核、膜同时出现不同颜色荧光的现象,但我们需要双激发的效果
箭头儿
(2015-5-11 15:43:26)
呵呵,我明白你的意思,但是很难做到。一般荧光的波长比激发光线的波长长一些,不同颜色的荧光染料要用不同的波长来激发,而荧光显微镜一次只能发出一种激发光线。你看到的资料中一个细胞被染成不同的颜色,那是用图像处理软件合成的。高级的显微镜像激光共聚焦显微镜都带有这种图像合成软件。
如果你所在的实验室没有图像处理仪,你可以分别原位拍摄蓝色、绿色或紫外激发的照片,然后在Adobe的图像处理软件PhotoShop中叠加成一幅照片。
鲇鱼少爷
(2015-5-11 15:43:49)
悬浮细胞的MTT法有人做过吗?我做的效果很不好
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【求助】求电镜前处理过程
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箭头儿 (2015-5-11 15:39:59)
鲇鱼少爷 (2015-5-11 15:40:21)
箭头儿 (2015-5-11 15:40:40)
戊二醛固定后在4摄氏度中保存一年以内都可以做,固定后在室温条件下短时间放置也不影响效果,固定后的盖玻片不要重叠以免细胞脱落。
鲇鱼少爷 (2015-5-11 15:41:00)
还有个问题想请教一下,做细胞凋亡的荧光观察,如何才能做双激发?我用的是双染,但每次只能用一种波长的光激发,没有同一画面核、膜同时出现不同颜色荧光的现象,但我们需要双激发的效果
箭头儿 (2015-5-11 15:43:26)
呵呵,我明白你的意思,但是很难做到。一般荧光的波长比激发光线的波长长一些,不同颜色的荧光染料要用不同的波长来激发,而荧光显微镜一次只能发出一种激发光线。你看到的资料中一个细胞被染成不同的颜色,那是用图像处理软件合成的。高级的显微镜像激光共聚焦显微镜都带有这种图像合成软件。
如果你所在的实验室没有图像处理仪,你可以分别原位拍摄蓝色、绿色或紫外激发的照片,然后在Adobe的图像处理软件PhotoShop中叠加成一幅照片。
鲇鱼少爷 (2015-5-11 15:43:49)
悬浮细胞的MTT法有人做过吗?我做的效果很不好
【求助】求电镜前处理过程